| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 文献综述 | 第9-16页 |
| 1.1 植物中咖啡碱概况 | 第9页 |
| 1.2 咖啡碱的生理功能 | 第9-10页 |
| 1.3 茶树体内咖啡碱的生物合成 | 第10-14页 |
| 1.3.1 茶树体内咖啡碱的分布规律 | 第10-11页 |
| 1.3.2 茶树中咖啡碱的生物合成途径 | 第11页 |
| 1.3.3 茶树体内咖啡碱合成部位 | 第11-12页 |
| 1.3.4 咖啡碱的生物合成的甲基供体和嘌呤环来源 | 第12页 |
| 1.3.5 咖啡碱合成过程中关键酶的研究进展 | 第12-14页 |
| 1.4 咖啡碱的综合利用研究进展 | 第14-16页 |
| 2 引言 | 第16-19页 |
| 2.1 研究目的与意义 | 第16页 |
| 2.2 研究内容 | 第16-17页 |
| 2.2.1 咖啡碱生物合成相关酶N-甲基核苷水解酶基因的功能验证 | 第16-17页 |
| 2.2.2 N-甲基核苷水解酶和CaXMT在大肠杆菌中的组合表达 | 第17页 |
| 2.3 技术路线 | 第17-19页 |
| 3 材料与方法 | 第19-30页 |
| 3.1 材料 | 第19页 |
| 3.2 仪器与试剂 | 第19-21页 |
| 3.2.1 主要实验仪器 | 第19-20页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第20页 |
| 3.2.3 主要试剂配方 | 第20-21页 |
| 3.3 方法 | 第21-30页 |
| 3.3.1 茶树中N-甲基核苷水解酶基因的功能验证 | 第21-28页 |
| 3.3.2 pMAL-ST3-CaXMT双基因融合表达载体的构建及体外酶活验证 | 第28-30页 |
| 4 结果与分析 | 第30-42页 |
| 4.1 茶树中N-甲基核苷水解酶基因的表达和体外酶活性检测 | 第30-37页 |
| 4.1.1 N-甲基核苷水解酶ST1、ST2和ST3的PCR扩增及表达载体的构建 | 第30-31页 |
| 4.1.2 pMAL-ST1、pMAL-ST2和pMAL-ST3表达载体的构建 | 第31页 |
| 4.1.3 pMAL-ST1、pMAL-ST2和pMAL-ST3在大肠杆菌中的诱导表达 | 第31-34页 |
| 4.1.4 pMAL-ST1、pMAL-ST2和pMAL-ST3的体外酶活性分析 | 第34-37页 |
| 4.2 pMAL-ST3-CaXMT双基因融合表达载体的构建及体外酶活验证 | 第37-42页 |
| 4.2.1 双基因融合表达载体pMAL-ST3-CaXMT的构建与鉴定 | 第37-38页 |
| 4.2.2 pMAL-ST3-CaXMT组合表达载体的SDS-PAGE凝胶电泳分析 | 第38-39页 |
| 4.2.3 pMAL-ST3-CaXMT组合表达载体的体外酶活检测 | 第39-41页 |
| 4.2.4 制作 7-MX标准曲线 | 第41-42页 |
| 5 讨论 | 第42-44页 |
| 5.1 N-甲基核苷水解酶基因的预期功能与结果比较 | 第42页 |
| 5.2 pMAL-ST3-CaXMT双基因融合表达载体的表达研究 | 第42-44页 |
| 5.2.1 pMAL-ST3-CaXMT双基因表达体系的设计 | 第42-43页 |
| 5.2.2 原核表达系统的选择 | 第43-44页 |
| 6 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 附录A 英文缩写及注释 | 第50-51页 |
| 附录B 茶树候选核苷酶STx核苷酸序列及CaXMT的ORF核苷酸序列 | 第51-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简介 | 第55页 |
