| 摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩略语表 | 第14-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-35页 |
| 1.1 脂肽类表面活性剂 | 第15-27页 |
| 1.1.1 脂肽表面活性剂简介 | 第15页 |
| 1.1.2 地衣素的结构与性质 | 第15-18页 |
| 1.1.3 地衣素生物合成酶操纵子 | 第18-19页 |
| 1.1.4 群体感应系统与脂肽生物合成调控 | 第19-22页 |
| 1.1.5 脂肽的增产策略 | 第22-27页 |
| 1.2 聚γ-谷氨酸 | 第27-33页 |
| 1.2.1 聚γ-谷氨酸简介 | 第27-28页 |
| 1.2.2 聚γ-谷氨酸生物合成与调控机制 | 第28-32页 |
| 1.2.3 外源添加物对聚γ-谷氨酸合成的影响 | 第32-33页 |
| 1.3 研究的目的和意义 | 第33-35页 |
| 第二章 地衣芽胞杆菌WX-02表面活性物质的分离纯化及结构分析 | 第35-53页 |
| 2.1 前言 | 第35-36页 |
| 2.2 材料和方法 | 第36-39页 |
| 2.2.1 菌株 | 第36页 |
| 2.2.2 培养基 | 第36页 |
| 2.2.3 表面活性物质发酵 | 第36-37页 |
| 2.2.4 试剂 | 第37页 |
| 2.2.5 实验仪器 | 第37页 |
| 2.2.6 地衣芽胞杆菌WX-02脂肽粗提物的制备 | 第37-38页 |
| 2.2.7 地衣芽胞杆菌WX-02脂肽化合物的氨基酸组分分析 | 第38页 |
| 2.2.8 地衣芽胞杆菌WX-02脂肽化合物的结构鉴定 | 第38-39页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第39-52页 |
| 2.3.1 GC-MS检测脂肽化合物的氨基酸组分 | 第39页 |
| 2.3.2 HPLC检测结果 | 第39-40页 |
| 2.3.3 地衣芽胞杆菌WX-02产生的脂肽化合物的ESI-MS分析 | 第40-52页 |
| 2.4 小结 | 第52-53页 |
| 第三章 地衣素高产工程菌株的构建 | 第53-86页 |
| 3.1 前言 | 第53-54页 |
| 3.2 材料和方法 | 第54-68页 |
| 3.2.1 菌株及质粒 | 第54-55页 |
| 3.2.2 培养基、培养温度和抗生素使用浓度 | 第55-56页 |
| 3.2.3 地衣素发酵 | 第56页 |
| 3.2.4 工具酶及试剂 | 第56页 |
| 3.2.5 PCR引物 | 第56-58页 |
| 3.2.6 抽提液和缓冲液 | 第58-59页 |
| 3.2.7 实验仪器 | 第59页 |
| 3.2.8 地衣素产量的测定 | 第59-60页 |
| 3.2.9 分子生物学方法 | 第60-62页 |
| 3.2.10 大肠杆菌重组质粒转化 | 第62页 |
| 3.2.11 地衣芽胞杆菌温敏型重组质粒的构建 | 第62-63页 |
| 3.2.12 地衣芽胞杆菌地衣素工程菌的构建 | 第63-65页 |
| 3.2.13 地衣芽胞杆菌总RNA的提取和纯化 | 第65页 |
| 3.2.14 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第65-67页 |
| 3.2.15 群游与生物被膜实验 | 第67-68页 |
| 3.2.16 数据处理 | 第68页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第68-85页 |
| 3.3.1 地衣芽胞杆菌地衣素工程菌WX02-P43lch的构建 | 第68-70页 |
| 3.3.2 地衣芽胞杆菌地衣素工程菌WX02-Psrflch的构建 | 第70-73页 |
| 3.3.3 地衣芽胞杆菌地衣素工程菌WX02-Pxyllch的构建 | 第73-76页 |
| 3.3.4 地衣芽胞杆菌地衣素工程菌WX02-△lchAC的构建 | 第76-78页 |
| 3.3.5 原始菌WX-02与地衣素工程菌总RNA的提取 | 第78-79页 |
| 3.3.6 不同启动子对地衣素合成及lchAA表达水平的影响 | 第79-83页 |
| 3.3.7 地衣素合成量对细菌群游与生物被膜形成能力的影响 | 第83-85页 |
| 3.4 小结 | 第85-86页 |
| 第四章 高产地衣素地衣芽胞杆菌WX02-Psrflch的摇瓶发酵工艺优化 | 第86-100页 |
| 4.1 前言 | 第86页 |
| 4.2 材料和方法 | 第86-90页 |
| 4.2.1 菌株 | 第86页 |
| 4.2.2 培养基 | 第86-87页 |
| 4.2.3 地衣素发酵 | 第87页 |
| 4.2.4 试剂 | 第87页 |
| 4.2.5 实验仪器 | 第87页 |
| 4.2.6 生物量及残留葡萄糖浓度的检测 | 第87页 |
| 4.2.7 地衣素产量的测定 | 第87页 |
| 4.2.8 发酵培养基的优化 | 第87-89页 |
| 4.2.9 发酵条件的优化 | 第89页 |
| 4.2.10 数据处理 | 第89-90页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第90-99页 |
| 4.3.1 地衣素发酵培养基的优化 | 第90-96页 |
| 4.3.2 地衣素发酵培养条件的优化 | 第96-98页 |
| 4.3.3 地衣芽胞杆菌WX02-Psrflch的分批发酵过程曲线 | 第98-99页 |
| 4.4 小结 | 第99-100页 |
| 第五章 地衣素对地衣芽胞杆菌聚γ-谷氨酸合成的影响 | 第100-127页 |
| 5.1 前言 | 第100页 |
| 5.2 材料和方法 | 第100-107页 |
| 5.2.1 菌株 | 第100-101页 |
| 5.2.2 培养基 | 第101页 |
| 5.2.3 聚γ-谷氨酸发酵 | 第101页 |
| 5.2.4 试剂 | 第101页 |
| 5.2.5 实验仪器 | 第101-102页 |
| 5.2.6 生物量的检测 | 第102页 |
| 5.2.7 聚γ-谷氨酸发酵液中地衣素浓度的测定 | 第102页 |
| 5.2.8 聚γ-谷氨酸的分离纯化 | 第102页 |
| 5.2.9 聚γ-谷氨酸浓度的检测 | 第102-103页 |
| 5.2.10 聚γ-谷氨酸分子量的检测 | 第103页 |
| 5.2.11 代谢流分析方法 | 第103-104页 |
| 5.2.12 谷氨酸和葡萄糖浓度的检测 | 第104页 |
| 5.2.13 胞外有机酸及溢流代谢产物浓度的检测 | 第104-105页 |
| 5.2.14 代谢物代谢通量的计算 | 第105页 |
| 5.2.15 地衣芽胞杆菌总RNA的提取和纯化 | 第105页 |
| 5.2.16 qRT-PCR引物 | 第105-106页 |
| 5.2.17 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第106页 |
| 5.2.18 数据处理 | 第106-107页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第107-125页 |
| 5.3.1 外源添加地衣素对聚γ-谷氨酸合成的影响 | 第107-109页 |
| 5.3.2 地衣素合成能力对聚γ-谷氨酸发酵的影响 | 第109-110页 |
| 5.3.3 地衣素对聚γ-谷氨酸发酵过程的影响 | 第110-118页 |
| 5.3.4 地衣素对聚γ-谷氨酸合成主要代谢途径中关键酶基因转录水平的影响 | 第118-123页 |
| 5.3.5 聚γ-谷氨酸合成调控网络中相关酶基因的转录水平 | 第123-125页 |
| 5.4 小结 | 第125-127页 |
| 第六章 结论与展望 | 第127-130页 |
| 6.1 结论 | 第127-128页 |
| 6.2 展望 | 第128-130页 |
| 参考文献 | 第130-145页 |
| 附录 | 第145-147页 |
| 致谢 | 第147-148页 |
| 在读期间发表论文 | 第148页 |
