| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 文献综述 | 第10-19页 |
| 1 微生物脂肪酶的研究进展 | 第10-14页 |
| ·产脂肪酶微生物种类 | 第11-12页 |
| ·微生物脂肪酶基因研究 | 第12-14页 |
| 2 脂肪酶的应用 | 第14-16页 |
| ·脂肪酶在食品加工中的应用 | 第14页 |
| ·脂肪酶在医药中的应用 | 第14页 |
| ·脂肪酶在化工业中的应用 | 第14-15页 |
| ·脂肪酶在环境治理中的应用 | 第15页 |
| ·脂肪酶在生物柴油中的应用 | 第15页 |
| ·脂肪酶作为饲料添加剂的应用 | 第15-16页 |
| 3 微生物脂肪酶的制备 | 第16-18页 |
| ·脂肪酶的分离提取 | 第16页 |
| ·全细胞生物作为催化剂 | 第16-17页 |
| ·提高微生物脂肪酶产量和活性的方法 | 第17-18页 |
| 4 研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 试验一 产脂肪酶细菌的筛选及对小鼠部分微生态学效应研究 | 第19-42页 |
| 1 实验材料 | 第19-21页 |
| ·土样 | 第19页 |
| ·主要试剂及制备方法 | 第19-20页 |
| ·培养基的配制 | 第20-21页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| ·实验动物 | 第21页 |
| 2 试验方法 | 第21-28页 |
| ·产脂肪酶菌株的筛选 | 第21-23页 |
| ·产脂肪酶菌株的鉴定 | 第23-24页 |
| ·菌株所产脂肪酶性质 | 第24-25页 |
| ·菌株生长曲线测定 | 第25页 |
| ·产脂肪酶细菌对小鼠的部分微生态学效应 | 第25-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-38页 |
| ·产脂肪酶菌初步筛选结果 | 第28-29页 |
| ·产脂肪酶菌株的鉴定 | 第29-32页 |
| ·菌株所产脂肪酶性质 | 第32-34页 |
| ·菌株生长曲线 | 第34页 |
| ·菌株的安全性试验 | 第34页 |
| ·芽孢杆菌PZ04制剂对小鼠增重的影响 | 第34-35页 |
| ·芽孢杆菌PZ04制剂对小鼠免疫器官的影响 | 第35-36页 |
| ·小鼠肠道菌群变化的PCR-DGGE分析 | 第36-37页 |
| ·小鼠不同周龄肠道菌群聚类分析 | 第37-38页 |
| 4 讨论 | 第38-42页 |
| ·产脂肪酶细菌的鉴定 | 第38-39页 |
| ·脂肪酶酶学性质 | 第39页 |
| ·菌株的安全性 | 第39页 |
| ·饲喂不同浓度的芽孢杆菌制剂对小鼠增重的影响 | 第39页 |
| ·饲喂不同浓度的芽孢杆菌制剂对小鼠免疫器官的影响 | 第39-40页 |
| ·饲喂不同浓度的芽孢杆菌制剂对小鼠肠道菌群的影响 | 第40-42页 |
| 试验二 枯草芽孢杆菌PZ04脂肪酶基因的克隆表达 | 第42-56页 |
| 1 实验材料 | 第42-44页 |
| ·实验菌株 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·主要溶液配制 | 第42-44页 |
| 2 试验方法 | 第44-49页 |
| ·PCR扩增PZ04脂肪酶基因 | 第44-45页 |
| ·载体pET-28a(+)的限制性酶切、纯化及去磷酸化处理 | 第45-46页 |
| ·目的基因与载体的连接 | 第46页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第46-47页 |
| ·重组表达菌株的构建 | 第47页 |
| ·脂肪酶基因在BL21(DE3)菌株中的诱导表达 | 第47-48页 |
| ·诱导条件的优化 | 第48页 |
| ·脂肪酶蛋白的纯化 | 第48-49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-54页 |
| ·PZO4脂肪酶基因的PCR扩增 | 第49-50页 |
| ·双酶切检测空白质粒pET-28a(+) | 第50页 |
| ·重组表达质粒pET-28a-PZ04的鉴定 | 第50-51页 |
| ·重组表达菌株的鉴定 | 第51页 |
| ·重组质粒的诱导表达及表达条件优化 | 第51-52页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第52-53页 |
| ·纯化后脂肪酶酶活的检测 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| ·脂肪酶基因的克隆 | 第54-55页 |
| ·蛋白表达与纯化 | 第55页 |
| ·重组菌所产酶的酶学性质 | 第55-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63页 |