| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-17页 |
| ·研究背景 | 第9-10页 |
| ·fat-1基因概述 | 第10-11页 |
| ·ω-3脂肪酸脱氢酶的生物学作用 | 第11-15页 |
| ·ω-3脂肪酸脱氢酶对抗心血管疾病方面的作用 | 第11-12页 |
| ·ω-3脂肪酸脱氢酶在神经系统方面的作用 | 第12页 |
| ·ω-3脂肪酸脱氢酶在抗癌方面的作用 | 第12-14页 |
| ·ω-3脂肪酸脱氢酶在体内的代谢 | 第14页 |
| ·ω-3脂肪酸脱氢酶在生物膜中的作用 | 第14-15页 |
| ·ω-3脂肪酸脱氢酶的调控功能 | 第15页 |
| ·脂肪酸脱氢酶的代谢途径及特点 | 第15-16页 |
| ·选题目的意义 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-38页 |
| ·实验材料 | 第17-23页 |
| ·实验材料的采集 | 第17页 |
| ·实验主要仪器设备 | 第17-18页 |
| ·载体选择 | 第18页 |
| ·菌株选择 | 第18页 |
| ·实验试剂及其厂家 | 第18-20页 |
| ·试剂配制 | 第20-23页 |
| ·家兔成纤维细胞的培养 | 第23页 |
| ·线虫的培养 | 第23-24页 |
| ·虫体的培养 | 第23-24页 |
| ·虫体形态的观察 | 第24页 |
| ·虫体的保存 | 第24页 |
| ·线虫总RNA提取 | 第24-25页 |
| ·线虫总RNA提取 | 第24-25页 |
| ·线虫总RNA检测 | 第25页 |
| ·反转录cDNA | 第25-26页 |
| ·反应体系 | 第25-26页 |
| ·反应条件 | 第26页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第26-28页 |
| ·PCR扩增 | 第26-27页 |
| ·PCR产物的检测 | 第27-28页 |
| ·克隆PCR反应产物 | 第28-31页 |
| ·回收与纯化PCR产物 | 第28-29页 |
| ·fat-1与T载体连接 | 第29页 |
| ·大肠杆菌感受态制备,采用CaCl_2法制备感受态细胞 | 第29-30页 |
| ·E.coli的热激转化 | 第30页 |
| ·亚克隆 | 第30-31页 |
| ·菌液PCR鉴定及保存 | 第31页 |
| ·重组表达载体的构建和测定 | 第31-33页 |
| ·抽提质粒 | 第31-32页 |
| ·fat-1基因的双酶切 | 第32-33页 |
| ·重组载体的构建 | 第33页 |
| ·重组质粒的提取 | 第33页 |
| ·转染、筛选及蛋白质的提取 | 第33-34页 |
| ·转染 | 第33-34页 |
| ·筛选转染成功的细胞 | 第34页 |
| ·线虫fat-1基因的表达 | 第34-38页 |
| ·重组蛋白质的分离提取 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白的检测 | 第35-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-50页 |
| ·家兔成纤维细胞的培养 | 第38-39页 |
| ·线虫fat-1基因CDS区克隆 | 第39-40页 |
| ·线虫fat-1基因的PCR扩增效果图 | 第39页 |
| ·线虫fat-1基因的亚克隆菌液PCR鉴定 | 第39-40页 |
| ·线虫fat-1基因的生物信息学分析 | 第40-46页 |
| ·线虫fat-1基因CDS区核苷酸和氨基酸序列分析 | 第40-42页 |
| ·线虫fat-1基因及其编码氨基酸的同源性分析 | 第42页 |
| ·ω-3脂肪酸脱氢酶疏水性分析 | 第42-43页 |
| ·线虫ω-3脂肪酸脱氢酶信号肽的分析 | 第43页 |
| ·线虫ω-3脂肪酸脱氢酶跨膜区的分析 | 第43-44页 |
| ·二级结构预测 | 第44-46页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第46-48页 |
| ·构建pfat1-GFP重组表达质粒 | 第46-47页 |
| ·重组表达载体的检测 | 第47-48页 |
| ·fat-1基因的真核表达 | 第48-50页 |
| ·fat-1基因的转染 | 第48-49页 |
| ·fat-1蛋白的SDS-PAGE检测及Western Blotting分析 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-55页 |
| ·线虫培养 | 第50页 |
| ·家兔成纤维细胞的培养 | 第50页 |
| ·真核表达载体的选择 | 第50-52页 |
| ·蛋白的表达 | 第52页 |
| ·酶切过程的星号活性问题 | 第52-53页 |
| ·实验过程中遇到的问题及解决方法 | 第53-55页 |
| 5 结论 | 第55-57页 |
| 6 参考文献 | 第57-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
