| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 1.引言 | 第13-26页 |
| ·研究背景 | 第13-16页 |
| ·能源危机 | 第13页 |
| ·纤维燃料乙醇国内外研究现状及趋势 | 第13-16页 |
| ·纤维素酶 | 第16-20页 |
| ·纤维素酶概述 | 第16-17页 |
| ·纤维素酶的特性 | 第17-19页 |
| ·纤维素酶的诱导和阻遏效应 | 第19页 |
| ·纤维素酶在国内应用现状与存在问题 | 第19-20页 |
| ·纤维素分解菌 | 第20-22页 |
| ·纤维分解菌的筛选 | 第20页 |
| ·青霉 | 第20-22页 |
| ·桔青霉 | 第22页 |
| ·青霉的纤维素酶及其分离纯化的研究进展 | 第22-24页 |
| ·青霉纤维素酶基因克隆与表达 | 第24页 |
| ·研究的目的与意义 | 第24-26页 |
| 2 菌株的分离与鉴定 | 第26-37页 |
| ·实验材料 | 第26-28页 |
| ·菌种 | 第26页 |
| ·培养基及配制 | 第26-28页 |
| ·主要试剂、仪器设备 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-32页 |
| ·菌株分离和纯化 | 第28-29页 |
| ·菌落形态特征 | 第29页 |
| ·显微形态观察 | 第29页 |
| ·生理生化特征 | 第29-30页 |
| ·核糖体-DNA ITS分析 | 第30页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第30-31页 |
| ·转化过程 | 第31页 |
| ·质粒提取 | 第31-32页 |
| ·实验结果 | 第32-36页 |
| ·刚果红染色定性 | 第32页 |
| ·形态分析 | 第32-33页 |
| ·生理生化分析 | 第33-35页 |
| ·核糖体-DNA ITS序列的同源性检索及系统发育分析 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-37页 |
| 3 CR-2菌株发酵产纤维素酶条件研究 | 第37-54页 |
| ·实验材料 | 第37-39页 |
| ·菌株 | 第37页 |
| ·培养基及配制 | 第37-38页 |
| ·主要试剂、仪器设备 | 第38-39页 |
| ·实验方法 | 第39-43页 |
| ·玉米秸秆的超声波碱法预处理 | 第39页 |
| ·粗酶液的制备 | 第39-40页 |
| ·葡萄糖标准曲线的制作方法 | 第40页 |
| ·羧甲基纤维素酶活(CMCase)活性测定 | 第40页 |
| ·滤纸酶活(FPA)的测定 | 第40-41页 |
| ·β-葡萄糖苷酶活的测定 | 第41页 |
| ·蛋白质标准曲线的制作方法 | 第41页 |
| ·发酵液不同时期蛋白质浓度的测定 | 第41-42页 |
| ·不同碳源对CR-2菌株产酶的影响 | 第42页 |
| ·不同氮源对CR-2菌株产酶的影响 | 第42页 |
| ·CR-2菌株对不同天然底物的利用 | 第42页 |
| ·发酵罐培养对CR-2菌株产酶的影响 | 第42页 |
| ·电镜照片的制作方法 | 第42-43页 |
| ·实验结果 | 第43-52页 |
| ·葡萄糖标准曲线 | 第43-44页 |
| ·蛋白质标准曲线 | 第44-45页 |
| ·羧甲基纤维素酶(CMCase)活性测定 | 第45页 |
| ·滤纸酶活(FPA)的测定 | 第45-46页 |
| ·β-葡萄糖苷酶活的测定 | 第46-47页 |
| ·发酵液不同时期蛋白质浓度的测定 | 第47页 |
| ·不同碳源对CR-2菌株产酶的影响 | 第47-48页 |
| ·不同氮源对CR-2菌产酶的影响 | 第48页 |
| ·不同天然底物的利用 | 第48-51页 |
| ·发酵罐培养对菌株产酶的影响 | 第51页 |
| ·CR-2菌株纤维素酶作用纤维素后的电镜照片 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| 4 CR-2菌株内切葡聚糖酶的分离纯化 | 第54-69页 |
| ·实验材料 | 第54-56页 |
| ·菌种 | 第55页 |
| ·培养基 | 第55-56页 |
| ·主要试剂、仪器设备 | 第56页 |
| ·实验方法 | 第56-60页 |
| ·蛋白电泳:SDS-PAGE操作步骤 | 第56-57页 |
| ·内切葡聚糖酶活性检测 | 第57-58页 |
| ·内切葡聚糖酶分离纯化方法 | 第58-60页 |
| ·实验结果 | 第60-66页 |
| ·内切葡聚糖酶活性检测 | 第60页 |
| ·饱和硫酸铵盐析 | 第60-62页 |
| ·层析住纯化结果 | 第62-64页 |
| ·二维色谱纯化结果 | 第64-66页 |
| ·内切葡聚糖酶的整体纯化结果 | 第66页 |
| ·内切葡聚糖酶分子量的测定 | 第66页 |
| ·讨论 | 第66-69页 |
| 5 CR-2菌株内切葡聚糖酶的酶学性质分析 | 第69-79页 |
| ·实验材料 | 第69-70页 |
| ·主要试剂 | 第69-70页 |
| ·仪器设备 | 第70页 |
| ·实验方法 | 第70-73页 |
| ·内切葡聚糖酶活测定方法 | 第70页 |
| ·内切葡聚糖酶的性质分析 | 第70-73页 |
| ·实验结果 | 第73-78页 |
| ·内切葡聚糖酶的最适温度 | 第73-74页 |
| ·内切葡聚糖酶的热稳定性 | 第74-75页 |
| ·内切葡聚糖酶的最适pH | 第75页 |
| ·内切葡聚糖酶的pH稳定性 | 第75-76页 |
| ·不同金属离子对内切葡聚糖酶活性的影响 | 第76-77页 |
| ·内切葡聚糖酶对不同底物的作用能力 | 第77页 |
| ·米氏常数的测定 | 第77-78页 |
| ·讨论 | 第78-79页 |
| 6 结论 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-86页 |
| 附录 | 第86-87页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及申请的专利 | 第87页 |