| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第10-21页 |
| 1.1 杆菌肽 | 第10-14页 |
| 1.1.1 杆菌肽简述 | 第10-11页 |
| 1.1.2 杆菌肽的生物合成机制 | 第11-13页 |
| 1.1.3 杆菌肽生物合成的代谢调控 | 第13-14页 |
| 1.2 芽胞杆菌胞外蛋白酶 | 第14-17页 |
| 1.2.1 芽胞杆菌胞外蛋白酶概述 | 第14-15页 |
| 1.2.2 芽胞杆菌胞外蛋白酶的调控 | 第15-16页 |
| 1.2.3 高产胞外蛋白酶菌株构建策略 | 第16-17页 |
| 1.3 全局性调控蛋白CodY简述 | 第17-20页 |
| 1.3.1 CodY的结构 | 第18页 |
| 1.3.2 CodY的效应分子 | 第18-19页 |
| 1.3.3 CodY对支链氨基酸代谢的调控作用 | 第19-20页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第20-21页 |
| 2. 材料和方法 | 第21-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-27页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第21-22页 |
| 2.1.2 PCR引物 | 第22-24页 |
| 2.1.3 培养基、培养温度及抗生素使用浓度 | 第24-25页 |
| 2.1.4 工具酶和试剂 | 第25页 |
| 2.1.5 抽提液和缓冲液 | 第25-26页 |
| 2.1.6 主要实验仪器 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-38页 |
| 2.2.1 分子生物学方法 | 第27-29页 |
| 2.2.2 地衣芽胞杆菌系列重组质粒的构建 | 第29-31页 |
| 2.2.3 大肠杆菌重组质粒转化 | 第31-32页 |
| 2.2.4 地衣芽胞杆菌重组质粒转化 | 第32页 |
| 2.2.5 地衣芽胞杆菌双交换突变体的获得 | 第32-33页 |
| 2.2.6 发酵培养条件 | 第33页 |
| 2.2.7 氨基酸抽提方法 | 第33-34页 |
| 2.2.8 RNA的抽提及其反转录 | 第34-35页 |
| 2.2.9 实时荧光定量PCR | 第35-36页 |
| 2.2.10 分析方法 | 第36-38页 |
| 3. 结果与分析 | 第38-62页 |
| 3.1 系列胞外蛋白酶游离表达对地衣芽胞杆菌杆菌肽发酵的影响 | 第38-45页 |
| 3.1.1 系列胞外蛋白酶游离表达载体的构建 | 第38-41页 |
| 3.1.2 系列胞外蛋白酶游离表达工程菌的构建 | 第41-42页 |
| 3.1.3 系列胞外蛋白酶游离表达对地衣芽胞杆菌杆菌肽发酵的影响 | 第42-44页 |
| 3.1.4 工程菌株DW2/pHY-P43aprE杆菌肽发酵培养基中豆粕浓度的优化 | 第44-45页 |
| 3.2 胞外蛋白酶AprE和BprA整合表达对地衣芽胞杆菌杆菌肽发酵的影响 | 第45-51页 |
| 3.2.1 胞外蛋白酶AprE和BprA整合表达载体的构建 | 第45-47页 |
| 3.2.2 胞外蛋白酶AprE和BprA整合表达工程菌的构建 | 第47-48页 |
| 3.2.3 胞外蛋白酶AprE和bprA整合表达对地衣芽胞杆菌杆菌肽发酵的影响 | 第48-51页 |
| 3.3 codY缺失对地衣芽胞杆菌杆菌肽发酵的影响 | 第51-56页 |
| 3.3.1 codY敲除载体的构建 | 第51-53页 |
| 3.3.2 codY缺失工程菌的构建 | 第53页 |
| 3.3.3 codY缺失对地衣芽胞杆菌杆菌肽发酵的影响 | 第53-56页 |
| 3.4 地衣芽胞杆菌codY缺失导致杆菌肽减产原因的探究 | 第56-62页 |
| 3.4.1 codY缺失对地衣芽胞杆菌生长的影响 | 第56-57页 |
| 3.4.2 codY缺失菌株对地衣芽胞杆菌杆菌肽效价及胞外氨基酸含量的影响 | 第57-59页 |
| 3.4.3 codY缺失对地衣芽胞杆菌杆菌体合成相关基因表达的影响 | 第59-62页 |
| 4. 讨论与展望 | 第62-65页 |
| 4.1 讨论 | 第62-64页 |
| 4.2 展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
