| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4页 |
| 1 引言 | 第8-16页 |
| 1.1 细菌素及其产生菌 | 第8-9页 |
| 1.2 肠球菌素及其产生菌 | 第9-12页 |
| 1.3 肠球菌素的抑菌机理及其应用 | 第12-14页 |
| 1.4 本文研究目的及意义 | 第14-16页 |
| 1.4.1 研究目的 | 第14页 |
| 1.4.2 研究意义 | 第14-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-24页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-18页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第16页 |
| 2.1.2 工具酶及试剂盒 | 第16页 |
| 2.1.3 培养基 | 第16-17页 |
| 2.1.4 PCR引物 | 第17页 |
| 2.1.5 主要仪器及设备 | 第17页 |
| 2.1.6 纯化蛋白所需试剂及配方 | 第17-18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-24页 |
| 2.2.1 E.faeciumBZ2的DNA提取 | 第18-19页 |
| 2.2.2 PCR反应 | 第19页 |
| 2.2.3 质粒与PCR产物胶回收 | 第19-20页 |
| 2.2.4 载体连接 | 第20页 |
| 2.2.5 转化大肠杆菌 | 第20页 |
| 2.2.6 质粒提取 | 第20-21页 |
| 2.2.7 质粒检测 | 第21页 |
| 2.2.8 entA和entB在大肠杆菌BL21(DE3)中的的基因表达 | 第21-22页 |
| 2.2.9 Ni-NTA亲和层析纯化重组蛋白 | 第22-23页 |
| 2.2.10 重组蛋白活性测定 | 第23-24页 |
| 3 实验结果 | 第24-35页 |
| 3.1 entA和entB基因PCR | 第24页 |
| 3.2 PCR产物回收 | 第24-25页 |
| 3.3 重组质粒构建及鉴定 | 第25-28页 |
| 3.3.1 连接、质粒提取、PCR验证 | 第25-26页 |
| 3.3.2 测序验证 | 第26-28页 |
| 3.4 细菌素在大肠杆菌中的表达 | 第28-29页 |
| 3.5 最佳诱导条件的确定 | 第29-33页 |
| 3.5.1 重组蛋白诱导培养基的确定 | 第29-30页 |
| 3.5.2 重组蛋白诱导温度的确定 | 第30-31页 |
| 3.5.3 重组蛋白诱导剂IPTG浓度的确定 | 第31-32页 |
| 3.5.4 重组蛋白诱导时间的确定 | 第32-33页 |
| 3.6 表达产物可溶性检测 | 第33页 |
| 3.7 重组蛋白的纯化 | 第33-34页 |
| 3.8 重组蛋白活性测定 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35-38页 |
| 4.1 肠球菌素的基因序列特征 | 第35页 |
| 4.2 细菌素载体构建及原核表达 | 第35-36页 |
| 4.3 细菌素抑菌作用 | 第36-38页 |
| 5 结论 | 第38-39页 |
| 致谢 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-46页 |
| 作者简介 | 第46页 |