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芽孢杆菌属β-甘露聚糖酶产生菌的分离、鉴定、酶学特性及基因克隆的研究

中文摘要第1-6页
Abstract第6-15页
第1章 绪论第15-29页
   ·甘露聚糖及β-甘露聚糖酶的研究概况第15-24页
     ·甘露聚糖酶简介第15页
     ·β-甘露聚糖酶简介第15-17页
     ·β-甘露聚糖酶的结构和作用机制第17-20页
     ·β-甘露聚糖酶的分子生物学研究第20-21页
     ·β-甘露聚糖酶的应用前景第21-23页
     ·魔芋甘露低聚糖的应用第23-24页
   ·研究的目的和意义第24页
   ·研究内容第24-26页
 参考文献第26-29页
第2章 β-甘露聚糖酶产生菌的分离筛选及菌株的初步鉴定第29-45页
   ·材料与方法第29-35页
     ·分离源第29页
     ·主要试剂及仪器第29-30页
     ·培养基第30页
     ·产β-甘露聚糖酶菌株的富集培养和分离筛选第30-31页
     ·菌株酶活力的测定第31-32页
     ·酶学性质筛选第32-33页
     ·β-甘露聚糖酶菌株的初步鉴定第33-35页
   ·实验结果与分析第35-42页
     ·D-甘露糖含量标准曲线的绘制第35-36页
     ·β-甘露聚糖酶菌株产生菌的富集、分离与筛选第36-37页
     ·酶学性质筛选第37-38页
     ·产β-甘露聚糖酶菌株的初步鉴定第38-42页
   ·本章小结第42-44页
 参考文献第44-45页
第3章 β-甘露聚糖酶产生菌CD-3、CD-6发酵条件优化研究第45-60页
   ·材料与方法第45-48页
     ·菌种第45页
     ·主要试剂及仪器第45页
     ·培养基第45-46页
     ·菌株的发酵及酶液的制备第46页
     ·B-甘露聚糖酶活力测定第46页
     ·菌株发酵产酶条件的优化第46-48页
   ·结果与分析第48-58页
     ·最佳碳源及其单因子分析第48-50页
     ·最佳氮源及其单因子分析第50-51页
     ·添加其他金属离子及表面活性剂对菌株发酵产酶的影响第51页
     ·不同初始PH对菌株产酶的影响第51-53页
     ·接种量对菌株产酶的影响第53-54页
     ·装液量对菌株产酶的影响第54页
     ·不同发酵温度、发酵时间对菌株产酶的影响第54-56页
     ·正交实验优化产酶条件第56-58页
   ·本章小结第58-59页
 参考文献第59-60页
第4章 六株芽孢杆菌属来源的β-甘露聚糖酶基因克隆与其氨基酸序第60-79页
   ·实验材料第60-61页
     ·菌株来源第60页
     ·主要仪器和设备第60-61页
     ·主要的生化和分子生物学试剂第61页
   ·实验方法第61-65页
     ·菌株的液体发酵第61页
     ·细菌总DNA的提取(CTAB法)第61-62页
     ·PCR扩增β-甘露聚糖酶基因第62-64页
     ·PCR产物与T载体的连接转化第64页
     ·试剂盒提取重组质粒第64-65页
     ·重组质粒的测序及序列分析第65页
   ·结果分析第65-76页
     ·基因组DNA的提取第65页
     ·β-甘露聚糖酶基因及序列分析第65-69页
     ·β-甘露聚糖酶氨基酸序列对比分析第69-72页
     ·蛋白结构的分析及同源模建第72-76页
   ·本章小结第76-77页
 参考文献第77-79页
第5章 酶学特性及动力学研究第79-94页
   ·实验材料第79-80页
     ·菌种第79页
     ·主要试剂及仪器第79-80页
     ·培养基第80页
     ·菌株的发酵及酶液的制备第80页
     ·β-甘露聚糖酶活力测定及定义第80页
   ·实验方法第80-83页
     ·菌株产β-甘露聚糖酶酶学特性第80-81页
     ·酶的底物亲和性及动力学比较研究第81-82页
     ·β-甘露聚糖酶比活力测定第82页
     ·等电点测定第82-83页
   ·结果与分析第83-91页
     ·酶反应的最适温度及温度耐受性第83-85页
     ·酶反应的最适pH与pH耐受性第85-86页
     ·金属离子对酶稳定性的影响第86页
     ·酶的底物亲和性及动力学比较研究第86-89页
     ·比活力的测定第89-90页
     ·等电点的测定第90-91页
   ·讨论第91页
   ·本章小结第91-93页
 参考文献第93-94页
第6章 魔芋低聚糖的酶法制备工艺初步研究第94-105页
   ·实验材料第94-95页
     ·酶液第94页
     ·主要试剂及仪器第94-95页
     ·培养基第95页
   ·实验方法第95-97页
     ·β-甘露聚糖酶酶活测定(DNS法)第95页
     ·魔芋精粉粘度的测定第95-96页
     ·魔芋精粉水解产物还原糖浓度的测定第96页
     ·影响还原糖转化率的单因素分析第96-97页
     ·β-甘露聚糖酶酶解产物的薄层层析第97页
   ·结果与分析第97-103页
     ·β-甘露聚糖酶酶活力测定第97页
     ·β-甘露聚糖酶对魔芋精粉粘度的影响第97-98页
     ·影响酶解效率的单因素分析第98-102页
     ·硅胶薄层层析检测酶解产物第102-103页
   ·本章小结第103-104页
 参考文献第104-105页
第7章 研究结果总结及展望第105-111页
   ·研究的主要成果第105-108页
     ·β-甘露聚糖酶产生菌的分离筛选及菌株的初步鉴定第105页
     ·β-甘露聚糖酶产生菌CD-3、CD-6发酵条件的优化第105-106页
     ·六株芽孢杆菌属来源的β-甘露聚糖酶的基因克隆及氨基酸序列分析第106-107页
     ·酶学特性及动力学研究第107-108页
     ·魔芋甘露低聚糖的酶法制备工艺研究第108页
   ·创新第108-109页
   ·后续的研究展望第109-111页
附录第111-131页
 附录1 实验中所使用的常用试剂的配制第111-113页
 附录2 16S rDNA序列测序结果第113-118页
 附录3 芽孢杆菌属菌株β-甘露聚糖酶基因序列第118-122页
 附录4 不同来源的六条β-甘露聚糖酶基因序列同源性比对结果第122-123页
 附录5 芽孢杆菌属菌株β-甘露聚糖酶氨基酸序列第123-125页
 附录6 芽孢杆菌属菌株β-甘露聚糖酶氨基酸序列在Genbank中同源性比较结果(BLASTP)第125-131页
攻读学位期间发表的学术论文和研究成果第131-132页
致谢第132页

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