| 中文摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 符号说明 | 第13-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-20页 |
| 1 罗丹明B概述 | 第15-16页 |
| 1.1 罗丹明B的理化性质 | 第15页 |
| 1.2 罗丹明B的应用 | 第15-16页 |
| 1.3 罗丹明B的毒性 | 第16页 |
| 2 罗丹明B检测方法研究进展 | 第16-19页 |
| 2.1 仪器检测法 | 第16-18页 |
| 2.1.1 分光光度法 | 第16-17页 |
| 2.1.2 高效液相色谱检测法 | 第17页 |
| 2.1.3 超高效液相色谱检测法 | 第17-18页 |
| 2.1.4 液相色谱-质谱联用法 | 第18页 |
| 2.1.5 荧光探针法 | 第18页 |
| 2.2 免疫检测方法 | 第18-19页 |
| 2.2.1 酶联免疫吸附试验 | 第18-19页 |
| 2.2.2 免疫亲和色谱 | 第19页 |
| 3 本研究的目的及意义 | 第19-20页 |
| 第二章 罗丹明B人工抗原的制备与鉴定 | 第20-27页 |
| 1 材料和方法 | 第20-23页 |
| 1.1 主要试剂 | 第20页 |
| 1.2 仪器与材料 | 第20页 |
| 1.3 主要溶液系统 | 第20页 |
| 1.4 罗丹明B人工抗原的制备 | 第20-22页 |
| 1.4.1 免疫原合成 | 第20-21页 |
| 1.4.2 包被原合成 | 第21-22页 |
| 1.5 人工抗原的分析 | 第22-23页 |
| 1.5.1 人工抗原紫外光谱扫描法鉴定 | 第22页 |
| 1.5.2 人工抗原SDS-PAGE凝胶电泳鉴定 | 第22-23页 |
| 1.5.3 人工抗原蛋白质浓度的测定 | 第23页 |
| 2 结果 | 第23-25页 |
| 2.1 人工抗原的紫外扫描结果 | 第23-25页 |
| 2.2 人工抗原SDS-PAGE凝胶电泳鉴定结果 | 第25页 |
| 2.3 人工抗原蛋白浓度的测定 | 第25页 |
| 3 讨论 | 第25-27页 |
| 第三章 罗丹明B单克隆抗体的制备及鉴定 | 第27-38页 |
| 1 材料和方法 | 第27-33页 |
| 1.1 实验动物与生物材料 | 第27页 |
| 1.2 主要试剂 | 第27页 |
| 1.3 实验仪器与耗材 | 第27-28页 |
| 1.4 主要溶液系统 | 第28-29页 |
| 1.4.1 ELISA溶液 | 第28页 |
| 1.4.2 细胞培养溶液 | 第28-29页 |
| 1.4.3 纯化使用液 | 第29页 |
| 1.5 罗丹明B单克隆抗体的制备 | 第29-33页 |
| 1.5.1 动物免疫程序 | 第29页 |
| 1.5.2 ELISA筛选系统的建立 | 第29-30页 |
| 1.5.2.1 iELISA操作程序 | 第29-30页 |
| 1.5.2.2 CiELISA操作程序 | 第30页 |
| 1.5.2.3 确定包被抗原工作浓度和阳性血清效价 | 第30页 |
| 1.5.3 细胞融合与培养 | 第30-32页 |
| 1.5.3.1 骨髓瘤细胞的培养 | 第30页 |
| 1.5.3.2 饲养细胞的制备 | 第30-31页 |
| 1.5.3.3 免疫脾细胞的制备 | 第31页 |
| 1.5.3.4 细胞融合 | 第31-32页 |
| 1.5.3.5 阳性孔的筛选 | 第32页 |
| 1.5.3.6 阳性孔的亚克隆 | 第32页 |
| 1.5.4 杂交瘤细胞株的稳定性试验及建株 | 第32页 |
| 1.5.5 腹水制备 | 第32页 |
| 1.5.6 腹水纯化 | 第32-33页 |
| 1.6 单克隆抗体的鉴定 | 第33页 |
| 1.6.1 纯化前后腹水蛋白浓度测定及抗体蛋白回收率测定 | 第33页 |
| 1.6.2 单克隆抗体特异性鉴定 | 第33页 |
| 2 结果 | 第33-36页 |
| 2.1 包被抗原的工作浓度和阳性血清效价的确定 | 第33-34页 |
| 2.2 融合前SP2/0生长状况 | 第34页 |
| 2.3 单克隆孔杂交瘤细胞生长状态 | 第34页 |
| 2.4 单克隆抗体细胞株的建立和稳定性 | 第34-35页 |
| 2.5 腹水的制备 | 第35页 |
| 2.6 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测腹水纯化效果 | 第35页 |
| 2.7 单克隆抗体的鉴定 | 第35-36页 |
| 2.7.1 腹水蛋白含量 | 第35-36页 |
| 2.7.2 抗体蛋白回收率 | 第36页 |
| 2.7.3 抗体特异性鉴定 | 第36页 |
| 3 讨论 | 第36-38页 |
| 第四章 腊肠中RB违法添加ELISA检测方法的建立 | 第38-45页 |
| 1 材料和方法 | 第38-39页 |
| 1.1 实验仪器与试剂 | 第38页 |
| 1.2 样品 | 第38页 |
| 1.3 ELSIA检测方法的建立 | 第38-39页 |
| 1.3.1 确定最佳封闭液 | 第38页 |
| 1.3.2 抗原抗体最佳工作浓度的确定 | 第38页 |
| 1.3.3 CiELISA标准工作曲线及相关参数 | 第38-39页 |
| 1.4 样品添加回收试验 | 第39页 |
| 1.4.1 样品处理方法 | 第39页 |
| 1.4.2 样品基质干扰 | 第39页 |
| 1.4.3 标准曲线的绘制 | 第39页 |
| 1.4.4 样品中罗丹明B回收率测定 | 第39页 |
| 2 结果 | 第39-44页 |
| 2.1 ELSIA检测方法的建立 | 第39-42页 |
| 2.1.1 最佳封闭条件的确定 | 第39-40页 |
| 2.1.2 抗原抗体工作浓度的确定 | 第40-41页 |
| 2.1.3 CiELISA标准工作曲线及参数 | 第41-42页 |
| 2.2 罗丹明B单克隆抗体的初步应用 | 第42-44页 |
| 2.2.1 样品基质十扰 | 第42-43页 |
| 2.2.2 样品溶液中标准曲线的绘制 | 第43-44页 |
| 2.3 样品添加回收率测定 | 第44页 |
| 3 讨论 | 第44-45页 |
| 第五章 罗丹明B胶体金快速检测试纸条的研制 | 第45-53页 |
| 1 材料与方法 | 第45-48页 |
| 1.1 试剂 | 第45页 |
| 1.2 主要仪器 | 第45页 |
| 1.3 胶体金试纸条试剂的配制 | 第45页 |
| 1.4 胶体金的制备与鉴定 | 第45-46页 |
| 1.4.1 器皿的清洁 | 第45页 |
| 1.4.2 柠檬酸三钠还原法制备不同粒径的胶体金 | 第45-46页 |
| 1.4.3 胶体金鉴定 | 第46页 |
| 1.4.3.1 肉眼观察法 | 第46页 |
| 1.4.3.2 紫外分光光度计扫描法 | 第46页 |
| 1.5 胶体金-单抗复合物的制备与纯化 | 第46-47页 |
| 1.5.1 最佳PH值的确定 | 第46页 |
| 1.5.2 最佳单抗标记量的确定 | 第46页 |
| 1.5.3 胶体金-单抗复合物的制备和纯化 | 第46-47页 |
| 1.6 试纸条的制备 | 第47页 |
| 1.6.1 金标垫的制备 | 第47页 |
| 1.6.2 NC膜的制备 | 第47页 |
| 1.6.2.1 NC膜C线的确定 | 第47页 |
| 1.6.2.2 NC膜T线的确定 | 第47页 |
| 1.7 组装试纸条 | 第47页 |
| 1.8 试纸条的使用方法及结果判定 | 第47-48页 |
| 1.9 试纸条的特异性、灵敏性和稳定性实验 | 第48页 |
| 1.9.1 特异性试验 | 第48页 |
| 1.9.2 灵敏度试验 | 第48页 |
| 1.9.3 稳定性试验 | 第48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-52页 |
| 2.1 胶体金的鉴定 | 第48-49页 |
| 2.1.1 胶体金的外观 | 第48页 |
| 2.1.2 胶体金的紫外扫描鉴定 | 第48-49页 |
| 2.2 金标抗体的制备 | 第49-51页 |
| 2.2.1 胶体金标记抗体最适pH值的测定 | 第49-50页 |
| 2.2.2 胶体金标记抗体最低稳定量的测定 | 第50-51页 |
| 2.2.3 金标垫的制备 | 第51页 |
| 2.3 NC膜的制备 | 第51页 |
| 2.3.1 NC膜C线的确定 | 第51页 |
| 2.3.2 NC膜T线的确定 | 第51页 |
| 2.5 试纸条性能 | 第51-52页 |
| 2.5.1 试纸条的特异性 | 第51页 |
| 2.5.2 试纸条的灵敏性 | 第51-52页 |
| 2.5.3 试纸条的稳定性 | 第52页 |
| 3 讨论 | 第52-53页 |
| 全文结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第63-64页 |
