| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第9-16页 |
| 1.1 选题来源 | 第9页 |
| 1.2 天冬氨酸激酶简介 | 第9-12页 |
| 1.2.2 天冬氨酸激酶的作用 | 第9-10页 |
| 1.2.3 天冬氨酸激酶的结构 | 第10-12页 |
| 1.3 AK研究进展 | 第12-15页 |
| 1.3.1 AK国外研究进展 | 第12-14页 |
| 1.3.2 AK的国内研究进展 | 第14-15页 |
| 1.4 研究内容 | 第15页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第15-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-25页 |
| 2.1 试验材料 | 第16-19页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第16页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第16-17页 |
| 2.1.3 培养基、常用缓冲液及储存液的配制 | 第17-18页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第18-19页 |
| 2.2 试验方法 | 第19-25页 |
| 2.2.1 定点突变位点的确定 | 第19页 |
| 2.2.2 质粒pET-28a-AK的提取 | 第19页 |
| 2.2.3 定点突变 | 第19页 |
| 2.2.4 突变质粒转化 | 第19-20页 |
| 2.2.5 突变株高通量筛选 | 第20页 |
| 2.2.6 AK基因验证 | 第20-21页 |
| 2.2.7 AK粗酶液制备 | 第21页 |
| 2.2.8 AK蛋白纯化 | 第21页 |
| 2.2.9 蛋白质含量测定 | 第21-22页 |
| 2.2.10 10% SDS-PAGE凝胶电泳 | 第22-23页 |
| 2.2.11 AK酶活力测定和动力学分析 | 第23页 |
| 2.2.12 AK酶学性质研究 | 第23-25页 |
| 3 结果与分析 | 第25-40页 |
| 3.1 突变位点的确定 | 第25-26页 |
| 3.2 突变PCR及AK基因验证 | 第26-28页 |
| 3.3 AK蛋白的SDS-PAGE和Western blot | 第28页 |
| 3.4 野生型和突变体AK动力学分析 | 第28-30页 |
| 3.5 酶学性质表征 | 第30-40页 |
| 3.5.1 最适pH和最适温度 | 第30-31页 |
| 3.5.2 热稳定性 | 第31-32页 |
| 3.5.3 金属离子对野生型和突变株AK酶活力的影响 | 第32-35页 |
| 3.5.4 有机溶剂对野生型和突变株AK酶活力的影响 | 第35-37页 |
| 3.5.5 抑制剂对野生型和突变株AK酶活力的影响 | 第37-40页 |
| 4 讨论 | 第40-41页 |
| 5 结论 | 第41-43页 |
| 参考文献 | 第43-49页 |
| 作者简介 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
