| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 第1章 文献综述 | 第9-25页 |
| 1.1 核黄素概述 | 第9-10页 |
| 1.1.1 核黄素发现史及理化性质 | 第9页 |
| 1.1.2 核黄素功能及用途 | 第9-10页 |
| 1.2 核黄素工业化生产 | 第10-13页 |
| 1.2.1 化学合成法 | 第11页 |
| 1.2.2 化学半合成法 | 第11-12页 |
| 1.2.3 微生物发酵法 | 第12-13页 |
| 1.3 枯草芽孢杆菌生产核黄素 | 第13-17页 |
| 1.3.1 核黄素合成代谢途径 | 第13-15页 |
| 1.3.2 核黄素操纵子 | 第15-16页 |
| 1.3.3 枯草芽孢杆菌核黄素高产菌株构建策略 | 第16-17页 |
| 1.4 基因组重排育种 | 第17-18页 |
| 1.5 基因组重排育种应用实例 | 第18-21页 |
| 1.5.1 提高菌株底物利用种类 | 第19页 |
| 1.5.2 提高产品产量及得率 | 第19-20页 |
| 1.5.3 提高菌株抗逆性能力 | 第20-21页 |
| 1.6 选题背景和研究内容 | 第21-25页 |
| 第2章 材料与方法 | 第25-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-31页 |
| 2.1.1 质粒与菌株 | 第25-26页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第26-27页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第27页 |
| 2.1.4 主要培养基 | 第27-29页 |
| 2.1.5 主要溶液 | 第29-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-41页 |
| 2.2.1 大肠杆菌和枯草芽孢杆菌质粒提取 | 第31-32页 |
| 2.2.2 枯草芽孢杆菌spizizen转化 | 第32-33页 |
| 2.2.3 枯草芽孢杆菌基因组提取 | 第33页 |
| 2.2.4 PCR | 第33-35页 |
| 2.2.5 酶切验证 | 第35页 |
| 2.2.6 原生质体融合 | 第35-37页 |
| 2.2.7 融合子初筛 | 第37页 |
| 2.2.8 摇瓶发酵 | 第37页 |
| 2.2.9 发酵罐发酵 | 第37-38页 |
| 2.2.10 琼脂糖凝胶电泳 | 第38页 |
| 2.2.11 菌体量、糖和核黄素浓度测定 | 第38-39页 |
| 2.2.12 目的基因无痕操作 | 第39页 |
| 2.2.13 以木聚糖作为碳源生理参数测定 | 第39-40页 |
| 2.2.14 使用HPLC高效液相测定产物 | 第40页 |
| 2.2.15 引物设计和基因测序 | 第40-41页 |
| 第3章 结果与讨论 | 第41-65页 |
| 3.1 亲株的构建与筛选 | 第41-44页 |
| 3.1.1 菌株B.subtilis X42复壮 | 第41-42页 |
| 3.1.2 菌株B.subtilis120spc的构建与筛选 | 第42-44页 |
| 3.2 基因组重排 | 第44-48页 |
| 3.2.1 亲株生长曲线的测定 | 第44-45页 |
| 3.2.2 原生质体融合 | 第45页 |
| 3.2.3 融合子初筛 | 第45-47页 |
| 3.2.4 融合子复筛 | 第47-48页 |
| 3.3 摇瓶培养基优化 | 第48-51页 |
| 3.3.1 酵母粉水解程度对核黄素产量的影响 | 第49-50页 |
| 3.3.2 尿素对核黄素产量的影响 | 第50-51页 |
| 3.4 主要生理指标分析 | 第51-53页 |
| 3.4.1 生长曲线对比 | 第51-52页 |
| 3.4.2 全基因组测序突变分析 | 第52-53页 |
| 3.4.3 摇瓶发酵液副产物分析 | 第53页 |
| 3.5 发酵罐发酵 | 第53-57页 |
| 3.5.1 分批发酵 | 第54页 |
| 3.5.2 流加发酵 | 第54-56页 |
| 3.5.3 流加发酵条件优化 | 第56-57页 |
| 3.6 利用木聚糖生产核黄素 | 第57-65页 |
| 3.6.1 菌株B.subtilis E2X6 的构建 | 第58-59页 |
| 3.6.2 菌株B.subtilis E2X6PAB的构建 | 第59-60页 |
| 3.6.3 工程菌初步发酵表征 | 第60-61页 |
| 3.6.4 利用木聚糖生产核黄素摇瓶发酵 | 第61-65页 |
| 第4章 结论与展望 | 第65-67页 |
| 4.1 结论 | 第65-66页 |
| 4.2 展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
