| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4页 |
| 第1章 文献综述 | 第7-21页 |
| 1.1 引言 | 第7页 |
| 1.2 3-羟基丙酸的概述 | 第7-8页 |
| 1.2.1 3-羟基丙酸的理化性质 | 第7-8页 |
| 1.2.2 3-羟基丙酸的应用 | 第8页 |
| 1.3 3-羟基丙酸的合成方法 | 第8-18页 |
| 1.3.1 化学合成法 | 第8-9页 |
| 1.3.2 微生物发酵法 | 第9-18页 |
| 1.4 枯草芽孢杆菌概述 | 第18-19页 |
| 1.5 选题背景和研究内容 | 第19-21页 |
| 1.5.1 选题背景 | 第19-20页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第20-21页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第21-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-29页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第21-22页 |
| 2.1.2 实验主要仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.3 实验主要试剂和药品 | 第23-25页 |
| 2.1.4 实验主要溶液 | 第25-27页 |
| 2.1.5 培养基 | 第27-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-39页 |
| 2.2.1 大肠杆菌DH5αCaCl_2法制备化转感受态 | 第29页 |
| 2.2.2 大肠杆菌DH5α感受态的化学转化 | 第29-30页 |
| 2.2.3 质粒DNA的提取 | 第30页 |
| 2.2.4 基因组DNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.2.5 DNA的扩增 | 第31-33页 |
| 2.2.6 DNA片段的酶切和连接 | 第33-34页 |
| 2.2.7 DNA片段的纯化 | 第34页 |
| 2.2.8 琼脂糖凝胶电泳 | 第34-35页 |
| 2.2.9 枯草芽孢杆菌spizizen转化 | 第35页 |
| 2.2.10 枯草芽孢杆菌基因无痕敲除或过表达 | 第35-36页 |
| 2.2.11 胞内蛋白质提取及浓度测定 | 第36-37页 |
| 2.2.12 MCR酶活测定 | 第37页 |
| 2.2.13 菌株的培养和发酵 | 第37-38页 |
| 2.2.14 生物量的测定 | 第38页 |
| 2.2.15 残葡萄糖的测定 | 第38页 |
| 2.2.16 发酵产物的测定 | 第38-39页 |
| 第3章 丙二酰辅酶A途径产3-羟基丙酸 | 第39-59页 |
| 3.1 关键基因mcr的过表达 | 第39-45页 |
| 3.1.1 不同强度mcr基因表达载体的构建 | 第39-43页 |
| 3.1.2 表达mcr基因对生产3-羟基丙酸的影响 | 第43-44页 |
| 3.1.3 MCR蛋白酶活检测 | 第44-45页 |
| 3.2 增强前体物丙二酰辅酶A的供给对合成3-羟基丙酸的影响 | 第45-57页 |
| 3.2.1 使用maker-free技术过表达accADBC基因 | 第45-53页 |
| 3.2.2 mcr基因和accADBC基因的表达优化 | 第53-57页 |
| 3.3 菌株评价 | 第57-59页 |
| 第4章 结论与展望 | 第59-61页 |
| 4.1 实验结论 | 第59-60页 |
| 4.2 展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 附录 | 第69-73页 |
| 发表论文及参加科研情况 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
