| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-24页 |
| ·谷氨酰胺转胺酶的概述 | 第12-16页 |
| ·谷氨酰胺转胺酶的催化特性 | 第12-13页 |
| ·TGase 的应用 | 第13-14页 |
| ·链霉菌TGase 的结构与作用机制 | 第14-15页 |
| ·链霉菌TGase 的活化机制及生理功能 | 第15-16页 |
| ·TGase 的发酵法生产 | 第16-17页 |
| ·野生菌发酵生产 | 第16-17页 |
| ·利用重组菌生产 | 第17页 |
| ·重组TGase 的表达策略 | 第17-21页 |
| ·TGase 的非活性表达 | 第18-19页 |
| ·TGase 的活性表达 | 第19-20页 |
| ·酶原区功能及其对TGase 异源表达的影响 | 第20-21页 |
| ·立题依据及研究意义 | 第21页 |
| ·本文主要研究内容 | 第21-24页 |
| 第二章 吸水链霉菌谷氨酰胺转胺酶基因克隆及其在变铅青链霉菌中的表达 | 第24-42页 |
| ·前言 | 第24页 |
| ·材料与方法 | 第24-32页 |
| ·菌株和质粒 | 第24页 |
| ·试剂和仪器 | 第24-26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·DNA 操作 | 第26-29页 |
| ·反向PCR | 第29页 |
| ·表达载体pIJ86/tg1 的构建与转化 | 第29-30页 |
| ·TGase 启动子缺失 | 第30-31页 |
| ·重组TGase 的生产 | 第31页 |
| ·分析方法 | 第31-32页 |
| ·结果与讨论 | 第32-41页 |
| ·反向PCR 扩增 S. hygroscopicus pro-TGase 上下游基因 | 第32-33页 |
| ·S. hygroscopicus TGase 基因序列分析 | 第33-35页 |
| ·S. hygroscopicus TGase 在S. lividans 中的表达 | 第35-39页 |
| ·S. hygroscopicus TGase 启动子鉴定 | 第39-41页 |
| ·本章小结 | 第41-42页 |
| 第三章 吸水链霉菌谷氨酰胺转胺酶酶原在大肠杆菌中的分泌表达 | 第42-58页 |
| ·引言 | 第42页 |
| ·材料与方法 | 第42-46页 |
| ·菌株和质粒 | 第42页 |
| ·试剂和仪器 | 第42-43页 |
| ·培养基 | 第43页 |
| ·DNA 操作 | 第43页 |
| ·大肠杆菌表达载体pET-20b/protg 和pET-22b/protg 的构建与转化 | 第43-44页 |
| ·大肠杆菌表达载体pET-22b/preprotg 的构建与转化 | 第44页 |
| ·编码N-端部分缺失的pro-TGase 的表载体的构建与转化 | 第44页 |
| ·Pro-TGase 的Tyr12 位点的突变 | 第44-45页 |
| ·重组pro-TGase 及其突变体的生产 | 第45页 |
| ·重组菌细胞破壁 | 第45页 |
| ·Pro-TGase 体外活化 | 第45页 |
| ·分析方法 | 第45-46页 |
| ·结果与讨论 | 第46-55页 |
| ·表达载体pET-20b/protg、pET-22b/protg 及pET-22b/preprotg 的构建 | 第46-47页 |
| ·大肠杆菌表达系统的构建 | 第47页 |
| ·重组酶在E. coli BL21(DE3)(pET-20b/protg)中的表达 | 第47-48页 |
| ·重组酶在E. coli BL21(DE3)(pET-22b/protg)中的表达 | 第48-49页 |
| ·诱导温度对重组pro-TGase 分泌表达的影响. | 第49-50页 |
| ·诱导剂浓度对重组pro-TGase 分泌表达的影响. | 第50-51页 |
| ·添加物对重组pro-TGase 分泌表达的影响 | 第51-52页 |
| ·信号肽对重组pro-TGase 分泌表达的影响 | 第52页 |
| ·酶原区对S. hygroscopicus TGase 在E. coli 中分泌表达的影响 | 第52-55页 |
| ·本章小结 | 第55-58页 |
| 第四章 吸水链霉菌谷氨酰胺转胺酶在大肠杆菌中的活性表达 | 第58-72页 |
| ·前言 | 第58页 |
| ·材料与方法 | 第58-63页 |
| ·菌株和质粒 | 第58页 |
| ·试剂和仪器 | 第58页 |
| ·培养基 | 第58-59页 |
| ·DNA 操作 | 第59页 |
| ·表达载体pET-22b/tg 的构建 | 第59-60页 |
| ·表达载体pET-22b/pro 和pET-22b/spro 的构建 | 第60页 |
| ·TGase 与其酶原区共表达载体的构建 | 第60-62页 |
| ·重组TGase 的生产 | 第62页 |
| ·重组菌细胞破壁 | 第62页 |
| ·分析方法 | 第62-63页 |
| ·结果与讨论 | 第63-70页 |
| ·S. hygroscopicus TGase 在E. coli 中的表达 | 第63页 |
| ·TGase 与酶原区在E. coli 中的共表达 | 第63-68页 |
| ·活性TGase 在E. coli 中的定位 | 第68-69页 |
| ·TGase 在E. coli 共表达体系中的成熟途径 | 第69-70页 |
| ·本章小结 | 第70-72页 |
| 第五章 谷氨酰胺转胺酶的分离纯化及其酶学性质研究 | 第72-86页 |
| ·前言 | 第72页 |
| ·材料与方法 | 第72-75页 |
| ·菌株和质粒 | 第72页 |
| ·试剂和仪器 | 第72-73页 |
| ·培养基 | 第73页 |
| ·天然TGase、重组pro-TGase 和重组TGase 的生产 | 第73页 |
| ·天然TGase 的纯化 | 第73页 |
| ·重组pro-TGase 与TGase 的纯化 | 第73-74页 |
| ·重组pro-TGase 的活化 | 第74页 |
| ·TGase 化学修饰 | 第74页 |
| ·分析方法 | 第74-75页 |
| ·结果与讨论 | 第75-84页 |
| ·天然TGase 蛋白纯化 | 第75-77页 |
| ·重组pro-TGase 与TGase 蛋白纯化 | 第77-79页 |
| ·pH 对TGase 酶学性质的影响 | 第79-80页 |
| ·温度对TGase 酶学性质的影响 | 第80页 |
| ·金属离子对TGase 活力的影响 | 第80-81页 |
| ·TGase 的动力学分析 | 第81-82页 |
| ·化学修饰TGase | 第82-84页 |
| ·本章小结 | 第84-86页 |
| 主要结论与展望 | 第86-90页 |
| 论文主要创新点 | 第90-92页 |
| 致谢 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-104页 |
| 附录：作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第104页 |
