| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-23页 |
| 1.1 人参皂苷的研究进展 | 第9-15页 |
| 1.1.1 人参皂苷的化学组分 | 第9页 |
| 1.1.2 人参皂苷的药用价值 | 第9-10页 |
| 1.1.3 人参皂苷的生物合成及其关键酶 | 第10-13页 |
| 1.1.4 人参皂苷的生产方式 | 第13-15页 |
| 1.2 酿酒酵母甲羟戊酸途径及其改造的研究进展 | 第15-21页 |
| 1.2.1 酿酒酵母细胞作为细胞工厂的优势 | 第15-16页 |
| 1.2.2 酿酒酵母类异戊二烯途径 | 第16-18页 |
| 1.2.3 酿酒酵母类异戊二烯途径在萜类化合物合成中的应用 | 第18-21页 |
| 1.3 本课题的目的及意义 | 第21-23页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第23-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-28页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第23-25页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第25页 |
| 2.1.3 药品与试剂 | 第25-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-36页 |
| 2.2.1 大肠杆菌及酿酒酵母、白假丝酵母菌的培养和保藏 | 第28页 |
| 2.2.2 碱裂解法抽提大肠杆菌质粒 | 第28-29页 |
| 2.2.3 玻璃珠法提取酵母（酿酒酵母和白色念珠菌）基因组 | 第29页 |
| 2.2.4 玻璃珠法抽提酿酒酵母质粒 | 第29-30页 |
| 2.2.5 PCR 扩增 | 第30页 |
| 2.2.6 凝胶电泳法检测 DNA | 第30-31页 |
| 2.2.7 DNA 片段的纯化 | 第31页 |
| 2.2.8 DNA 的酶切与连接反应 | 第31-32页 |
| 2.2.9 大肠杆菌感受态的制备 | 第32页 |
| 2.2.10 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第32页 |
| 2.2.11 酿酒酵母细胞的转化 | 第32-33页 |
| 2.2.12 DS 异源基因密码子优化及其合成 | 第33页 |
| 2.2.13 酿酒酵母粗蛋白的提取 | 第33-34页 |
| 2.2.14 SDS-PAGE 蛋白电泳 | 第34页 |
| 2.2.15 从酿酒酵母中提取达玛烯二醇 | 第34-35页 |
| 2.2.16 LC-MS 检测达玛烯二醇含量 | 第35-36页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第36-72页 |
| 3.1 达玛烯二醇工程酵母的初步构建 | 第36-41页 |
| 3.1.1 用于过表达异源基因 DS 的载体构建 | 第36-40页 |
| 3.1.2 醋酸锂法实现 DS 基因过表达载体游离于酿酒酵母细胞 | 第40-41页 |
| 3.2 酿酒酵母细胞三萜类化合物合成平台的优化 | 第41-55页 |
| 3.2.1 用于过量表达酿酒酵母内源基因 Hmg1、Erg20、Erg1 的载体构建 | 第41-49页 |
| 3.2.2 醋酸锂法实现内源基因 Hmg1、Erg20、Erg1 在酿酒酵母细胞中的过表达 | 第49-51页 |
| 3.2.3 用于弱化 Erg27 基因表达量的质粒构建 | 第51-53页 |
| 3.2.4 利用两步基因置换法置换 Erg27 启动子为弱启动子 | 第53-55页 |
| 3.2.5 甲硫氨酸对 W303a erg27:: MET3p-tERG27 的抑制作用 | 第55页 |
| 3.3 模块与底盘的进一步适配 | 第55-69页 |
| 3.3.1 用于过量表达白色念珠菌 Erg1 的载体构建 | 第56-59页 |
| 3.3.2 醋酸锂法实现白假丝酵母 Erg1 以游离态过表达于酿酒酵母细胞中 | 第59-60页 |
| 3.3.3 用于过量表达密码子优化的 DS 基因的载体构建 | 第60-63页 |
| 3.3.4 醋酸锂法实现密码子优化的 DS 基因游离表达于酿酒酵母细胞中 | 第63-64页 |
| 3.3.5 达玛烯二醇合成酶与鲨烯环氧酶的两种形式融合蛋白的构建 | 第64-67页 |
| 3.3.6 醋酸锂法实现达玛烯二醇合成酶与鲨烯环氧酶的两种融合蛋白游离表达于 酿酒酵母细胞中 | 第67页 |
| 3.3.7 合成达玛烯二醇的酿酒酵母 W303a、YSG50、BY4742 细胞的构建 | 第67-68页 |
| 3.3.8 表达 DS 的酿酒酵母细胞胞内粗酶的提取 | 第68-69页 |
| 3.4 发酵实验结果 | 第69-72页 |
| 3.4.1 种子生长曲线 | 第69-70页 |
| 3.4.2 发酵条件 | 第70-71页 |
| 3.4.3 LC-MS 检测发酵样品 | 第71-72页 |
| 第四章 结论与展望 | 第72-74页 |
| 4.1 结论 | 第72页 |
| 4.2 展望 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-81页 |
| 发表论文情况说明 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
