| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-20页 |
| ·蔗糖异构酶的概述 | 第10-14页 |
| ·蔗糖异构酶的来源 | 第10-11页 |
| ·蔗糖异构酶的三级结构 | 第11页 |
| ·蔗糖异构酶催化机理 | 第11-13页 |
| ·蔗糖异构酶的制备 | 第13页 |
| ·蔗糖异构酶的热稳定性改造 | 第13-14页 |
| ·异麦芽酮糖概述 | 第14-17页 |
| ·异麦芽酮糖的理化性质 | 第14-15页 |
| ·异麦芽酮糖的生理功能 | 第15-16页 |
| ·异麦芽酮糖的生产 | 第16-17页 |
| ·微生物转化法 | 第16页 |
| ·酶转化法 | 第16-17页 |
| ·异麦芽酮糖提取纯化工艺 | 第17页 |
| ·立题依据和研究意义 | 第17-18页 |
| ·主要研究内容 | 第18-20页 |
| 第二章 材料和方法 | 第20-29页 |
| ·实验材料 | 第20-21页 |
| ·菌种和质粒 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20-21页 |
| ·培养基 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-26页 |
| ·pET-24a(+)-pal I重组质粒的构建 | 第21-23页 |
| ·密码子优化 | 第22页 |
| ·E. coli热激转化感受态细胞的制备 | 第22页 |
| ·E. coli感受态细胞的热激转化 | 第22页 |
| ·pET-24a(+)-pal I表达载体的构建 | 第22-23页 |
| ·重组菌E.coli BL21(DE3)/pET-24a(+)-pal I的构建与培养 | 第23页 |
| ·pET-24a(+)-pal I转化表达宿主E. coli BL21(DE3) | 第23页 |
| ·重组菌的摇瓶发酵产酶 | 第23页 |
| ·重组菌在 3 L发酵罐的高密度发酵培养 | 第23页 |
| ·突变体的构建与转化 | 第23-24页 |
| ·重组短小芽孢杆菌的构建与培养 | 第24-26页 |
| ·重组质粒pSVEB-pal ILSP的构建 | 第24-25页 |
| ·短小芽孢杆菌感受态细胞的制备及电转化 | 第25页 |
| ·重组短小芽孢杆菌B. brevis/pSVEB-pal ILSP的培养 | 第25-26页 |
| ·分析方法 | 第26-29页 |
| ·菌体光密度(OD600)的测定 | 第26页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第26页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第26页 |
| ·蔗糖异构酶活力的测定 | 第26页 |
| ·重组蔗糖异构酶的纯化 | 第26页 |
| ·重组蔗糖异构酶的酶学性质分析 | 第26-27页 |
| ·重组蔗糖异构酶最适pH及pH稳定性 | 第26-27页 |
| ·重组蔗糖异构酶最适温度及温度稳定性 | 第27页 |
| ·金属离子和试剂对重组蔗糖异构酶活力的影响 | 第27页 |
| ·重组酶的动力学参数测定 | 第27页 |
| ·酶转化蔗糖生成异麦芽酮糖的反应条件优化 | 第27-28页 |
| ·pH值对蔗糖异构酶转化蔗糖生产异麦芽酮糖的影响 | 第27页 |
| ·温度对蔗糖异构酶转化蔗糖生产异麦芽酮糖的影响 | 第27页 |
| ·加酶量对蔗糖异构酶转化蔗糖生产异麦芽酮糖的影响 | 第27-28页 |
| ·反应时间对蔗糖异构酶转化蔗糖生产异麦芽酮糖的影响 | 第28页 |
| ·底物浓度对蔗糖异构酶转化蔗糖生产异麦芽酮糖的影响 | 第28页 |
| ·HPLC检测含量 | 第28页 |
| ·生物学软件预测和分析 | 第28-29页 |
| ·氨基酸序列的比对及酶三维结构模拟 | 第28页 |
| ·罗塞塔软件预测 | 第28页 |
| ·能量最小化计算 | 第28页 |
| ·蛋白质氢键分析 | 第28-29页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第29-52页 |
| ·S. plymuthica蔗糖异构酶在大肠杆菌中的异源表达 | 第29-34页 |
| ·蔗糖异构酶在E. coli BL21(DE3)中的异源表达 | 第29-34页 |
| ·蔗糖异构酶的基因优化 | 第29-30页 |
| ·重组工程菌E. coli BL21(DE3)/pET-24a-pal I的构建 | 第30-31页 |
| ·重组菌E. coli BL21(DE3)/pET-24a-pal I摇瓶产酶研究 | 第31-32页 |
| ·3 L罐中重组菌高密度发酵生产蔗糖异构酶 | 第32-34页 |
| ·重组蔗糖异构酶的纯化、酶学定性及应用条件优化 | 第34-41页 |
| ·重组蔗糖异构酶的分离纯化 | 第34-35页 |
| ·重组蔗糖异构酶的酶学性质研究 | 第35-38页 |
| ·重组蔗糖异构酶的最适pH和pH稳定性 | 第35-36页 |
| ·重组蔗糖异构酶的最适温度及温度稳定性 | 第36-37页 |
| ·金属离子对重组蔗糖异构酶酶活的影响 | 第37-38页 |
| ·重组酶动力学参数的测定 | 第38页 |
| ·重组蔗糖异构酶制备异麦芽酮糖条件优化 | 第38-41页 |
| ·初始pH的影响 | 第39页 |
| ·反应温度的影响 | 第39-40页 |
| ·加酶量的影响 | 第40页 |
| ·反应时间的影响 | 第40-41页 |
| ·底物浓度的影响 | 第41页 |
| ·定点突变提高蔗糖异构酶的热稳定性和催化效率 | 第41-48页 |
| ·突变位点的选择和蔗糖异构酶突变体的构建 | 第42-43页 |
| ·重组蔗糖异构酶突变体的纯化 | 第43-44页 |
| ·突变体的酶学性质分析 | 第44-46页 |
| ·最适pH的测定 | 第44页 |
| ·突变体的最适温度及温度稳定性 | 第44-45页 |
| ·突变体动力学参数的测定 | 第45-46页 |
| ·突变体在异麦芽酮糖生产中的应用 | 第46页 |
| ·突变体性能改善的原因分析 | 第46-48页 |
| ·蔗糖异构酶在B. brevis中的异源表达 | 第48-52页 |
| ·重组表达载体pSVEB-pal ILSP的构建 | 第49-51页 |
| ·重组工程菌B. brevis/pSVEB-pal ILSP的构建与培养 | 第51-52页 |
| 主要结论与展望 | 第52-54页 |
| 主要结论 | 第52-53页 |
| 展望 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第59页 |
