| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-14页 |
| ·羟脯氨酸概述 | 第8-10页 |
| ·顺式3羟脯氨酸的应用 | 第8-9页 |
| ·顺式3羟脯氨酸的生产 | 第9-10页 |
| ·国内外研究现状 | 第10-12页 |
| ·微生物法生产顺式3羟脯氨酸的发展 | 第10-11页 |
| ·顺式3羟脯氨酸生产现状 | 第11-12页 |
| ·本课题的意义和主要研究内容 | 第12-14页 |
| ·研究意义 | 第12页 |
| ·研究内容 | 第12-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-26页 |
| ·材料 | 第14-17页 |
| ·菌种和质粒 | 第14页 |
| ·主要试剂 | 第14-15页 |
| ·主要仪器 | 第15页 |
| ·培养基 | 第15-16页 |
| ·主要溶液 | 第16-17页 |
| ·菌株构建和培养方法 | 第17-23页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第17页 |
| ·基因优化设计 | 第17页 |
| ·色氨酸串联启动子的引入 | 第17-19页 |
| ·重组大肠杆菌的构建 | 第19-20页 |
| ·γ-谷氨酸激酶基因在重组大肠杆菌中的克隆 | 第20-21页 |
| ·重组大肠杆菌的培养 | 第21-22页 |
| ·重组大肠杆菌发酵优化 | 第22-23页 |
| ·引入 γ-谷氨酸激酶基因的重组大肠杆菌摇瓶发酵 | 第23页 |
| ·分析检测方法 | 第23-26页 |
| ·蛋白表达分析 | 第23页 |
| ·重组大肠杆菌全细胞酶活的测定 | 第23-24页 |
| ·顺式3羟脯氨酸和L-脯氨酸浓度分析 | 第24-26页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第26-48页 |
| ·脯氨酸3羟化酶基因的优化设计 | 第26-31页 |
| ·脯氨酸3羟化酶基因密码子分析 | 第26-27页 |
| ·脯氨酸3羟化酶基因稀有密码子的优化 | 第27-29页 |
| ·脯氨酸3羟化酶mRNA二级结构的优化 | 第29-31页 |
| ·重组大肠杆菌的构建 | 第31-37页 |
| ·组成型色氨酸串联启动子的引入 | 第31-32页 |
| ·宿主菌的选择 | 第32-33页 |
| ·质粒的选择 | 第33-35页 |
| ·脯氨酸3羟化酶表达分析 | 第35-37页 |
| ·重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET21a-Ptrp2-P3H摇瓶发酵 | 第37-46页 |
| ·重组大肠杆菌生长曲线的测定 | 第37-38页 |
| ·底物L-脯氨酸浓度的选择 | 第38-39页 |
| ·接种量的选择 | 第39页 |
| ·培养基营养的选择 | 第39-42页 |
| ·培养条件的优化 | 第42-43页 |
| ·发酵优化 | 第43-46页 |
| ·以葡萄糖为底物生产顺式3羟脯氨酸 | 第46-48页 |
| ·γ-谷氨酸激酶基因(proBA’)的引入 | 第46-47页 |
| ·无外源L-脯氨酸添加发酵生产顺式3羟脯氨酸 | 第47-48页 |
| 主要结论与展望 | 第48-50页 |
| 主要结论 | 第48-49页 |
| 展望 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-54页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第54页 |