| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-17页 |
| ·羰基还原酶不对称制备芳基手性醇 | 第9-10页 |
| ·羰基还原酶 | 第9页 |
| ·羰基还原酶不对称制备芳基手性醇 | 第9-10页 |
| ·羰基还原酶生物催化产业化存在的问题 | 第10页 |
| ·羰基还原酶的基因工程改造 | 第10-12页 |
| ·羰基还原酶的定向进化 | 第11页 |
| ·羰基还原酶的定点突变 | 第11-12页 |
| ·辅酶再生策略 | 第12-14页 |
| ·底物偶联法（Substrate-coupled method） | 第12-13页 |
| ·酶偶联法（Enzyme-coupled method） | 第13-14页 |
| ·葡萄糖脱氢酶用于大规模手性合成中的辅酶再生 | 第14-15页 |
| ·葡萄糖脱氢酶基因的克隆 | 第14页 |
| ·羰基还原酶与葡萄糖脱氢酶共表达体系的构建 | 第14-15页 |
| ·论文的研究意义和内容 | 第15-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-29页 |
| ·实验材料 | 第17-19页 |
| ·菌株与质粒 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17-18页 |
| ·实验仪器 | 第18页 |
| ·培养基与缓冲液 | 第18-19页 |
| ·实验方法 | 第19-29页 |
| ·定点突变改变SCRII 催化苯乙酮衍生物底物选择性研究 | 第19-22页 |
| ·突变位点的选择 | 第19页 |
| ·突变基因的PCR 扩增 | 第19-20页 |
| ·突变基因与pMD19-T 连接 | 第20页 |
| ·大肠杆菌E.coli/DH5α感受态细胞的制备 | 第20页 |
| ·重组pMD19-T 载体转化E.coli/DH5α感受态细胞 | 第20-21页 |
| ·重组大肠杆菌E.coli/DH5α菌落PCR 验证 | 第21页 |
| ·重组pMD19-T 载体的提取 | 第21页 |
| ·重组质粒的酶切验证 | 第21页 |
| ·突变基因与pET-28a 连接 | 第21页 |
| ·重组表达质粒转化E.coli/BL21 感受态细胞 | 第21页 |
| ·重组表达质粒的提取及酶切鉴定 | 第21页 |
| ·重组突变蛋白的诱导表达 | 第21页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 分析 | 第21-22页 |
| ·重组酶活力测定 | 第22页 |
| ·产物检测方法的建立 | 第22页 |
| ·重组突变株不对称还原苯乙酮衍生物 | 第22页 |
| ·Bacillus sp. YX-1 葡萄糖脱氢酶的克隆表达及其酶学性质 | 第22-25页 |
| ·Bacillus sp. YX-1 基因组的提取 | 第22页 |
| ·Bacillus sp. YX-1 葡萄糖脱氢酶保守序列的克隆 | 第22-23页 |
| ·Bacillus sp. YX-1 葡萄糖脱氢酶的克隆及表达载体的构建 | 第23-24页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第24页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第24页 |
| ·酶活力的测定 | 第24页 |
| ·辅酶依赖型 | 第24-25页 |
| ·有机溶剂对酶活性的影响 | 第25页 |
| ·底物特异性 | 第25页 |
| ·最适反应温度与热稳定性 | 第25页 |
| ·最适反应pH 与pH 稳定性 | 第25页 |
| ·辅酶再生体系的构建 | 第25-29页 |
| ·共表达重组菌的构建 | 第26-27页 |
| ·融合表达重组菌的构建 | 第27页 |
| ·共表达及融合表达重组菌的诱导表达 | 第27-28页 |
| ·共表达蛋白及融合蛋白酶活的测定 | 第28页 |
| ·重组菌株不对称还原苯乙酮 | 第28页 |
| ·辅酶NADP+的添加量对游离酶反应体系的影响 | 第28页 |
| ·游离酶体系底物分批补料催化苯乙酮 | 第28-29页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第29-43页 |
| ·定点突变改变SCRII 催化苯乙酮衍生物的底物选择性 | 第29-32页 |
| ·突变株的构建 | 第29页 |
| ·突变蛋白的诱导表达 | 第29-30页 |
| ·相应产物检测方法的建立 | 第30-31页 |
| ·重组突变蛋白酶活力的测定 | 第31页 |
| ·重组突变株不对称还原苯乙酮衍生物 | 第31-32页 |
| ·葡萄糖脱氢酶的克隆表达及酶学性质 | 第32-37页 |
| ·Bacillus sp. YX-1 葡萄糖脱氢酶基因的克隆与表达 | 第32-33页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及纯化 | 第33-34页 |
| ·GDH 的辅酶依赖型 | 第34页 |
| ·GDH 的有机溶剂耐受性 | 第34-35页 |
| ·GDH 的底物特异性 | 第35页 |
| ·GDH 的最适反应温度与热稳定性 | 第35-36页 |
| ·GDH 的最适反应pH 与pH 稳定性 | 第36-37页 |
| ·共表达与融合表达体系的构建 | 第37-43页 |
| ·共表达重组菌的构建 | 第37页 |
| ·融合表达重组菌的构建 | 第37-38页 |
| ·共表达蛋白及融合蛋白的诱导表达 | 第38-39页 |
| ·羰基还原酶及葡萄糖脱氢酶酶活的测定 | 第39页 |
| ·全细胞不对称还原苯乙酮 | 第39-40页 |
| ·游离酶体系不对称还原苯乙酮 | 第40-43页 |
| ·辅酶NADP+的添加量对游离酶体系反应的影响 | 第41页 |
| ·底物分批补料策略提高游离酶体系催化苯乙酮的底物浓度 | 第41-43页 |
| 主要结论和展望 | 第43-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-52页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第52页 |
