| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-14页 |
| 1.1 MTHase的概述 | 第8-11页 |
| 1.1.1 MTHase的来源 | 第8页 |
| 1.1.2 MTHase的结构与酶学性质 | 第8-10页 |
| 1.1.3 MTHase的催化机制及底物专一性 | 第10页 |
| 1.1.4 MTHase的制备研究进展 | 第10-11页 |
| 1.2 海藻糖的概述 | 第11-12页 |
| 1.2.1 海藻糖的结构、性质和功能 | 第11页 |
| 1.2.2 海藻糖的制备方法 | 第11-12页 |
| 1.3 提高E.coli可溶性表达重组蛋白的研究进展 | 第12页 |
| 1.4 立体依据及意义 | 第12-13页 |
| 1.5 本论文的主要研究内容 | 第13-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-23页 |
| 2.1 实验材料 | 第14-16页 |
| 2.1.1 菌种、质粒及基因 | 第14页 |
| 2.1.2 药品及试剂 | 第14页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第14-15页 |
| 2.1.4 培养基 | 第15-16页 |
| 2.2 实验相关操作方法 | 第16-20页 |
| 2.2.1 感受态细胞的制备、质粒抽提和转化 | 第16页 |
| 2.2.2 重组质粒及突变文库的构建 | 第16-19页 |
| 2.2.3 突变文库的培养和发酵 | 第19页 |
| 2.2.4 重组E.coli摇瓶发酵 | 第19页 |
| 2.2.5 重组E.coli 3L罐发酵 | 第19-20页 |
| 2.3 分析方法 | 第20-22页 |
| 2.3.1 菌体浓度(OD_(600))的测定 | 第20页 |
| 2.3.2 酶活力的测定 | 第20-21页 |
| 2.3.3 SDS-PAGE聚丙烯酰胺电泳分析 | 第21页 |
| 2.3.4 重组蛋白的分离纯化 | 第21页 |
| 2.3.5 重组蛋白的酶学性质研究 | 第21-22页 |
| 2.3.6 重组蛋白浓度的测定 | 第22页 |
| 2.4 双酶法制备海藻糖 | 第22-23页 |
| 2.4.1 海藻糖制备工艺 | 第22页 |
| 2.4.2 转化产物检测 | 第22页 |
| 2.4.3 转化产物海藻糖转化率计算 | 第22-23页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第23-42页 |
| 3.1 MTHase的理性改造 | 第23-30页 |
| 3.1.1 MTHase表面疏水氨基酸的选择 | 第23页 |
| 3.1.2 MTHase的定点突变 | 第23-24页 |
| 3.1.3 MTHase的叠加突变 | 第24-25页 |
| 3.1.4 野生型和突变体的蛋白纯化 | 第25-27页 |
| 3.1.5 野生型和突变体的酶学性质及应用研究 | 第27-30页 |
| 3.2 MTHase的非理性改造 | 第30-39页 |
| 3.2.1 MTHase随机突变库酶活检测方法的建立 | 第30-32页 |
| 3.2.2 突变体文库的构建 | 第32-33页 |
| 3.2.3 突变文库的高通量筛选 | 第33页 |
| 3.2.4 突变体的构建与酶学性质研究 | 第33-34页 |
| 3.2.5 突变体蛋白纯化分析 | 第34-35页 |
| 3.2.6 突变体的酶学性质及应用研究 | 第35-39页 |
| 3.3 突变体MTHase~m 3L罐的发酵优化 | 第39-42页 |
| 3.3.1 诱导时机对突变体发酵的影响 | 第39-40页 |
| 3.3.2 诱导温度对突变体发酵的影响 | 第40页 |
| 3.3.3 诱导浓度对突变体发酵的影响 | 第40-42页 |
| 主要结论与展望 | 第42-43页 |
| 主要结论 | 第42页 |
| 展望 | 第42-43页 |
| 致谢 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-48页 |
| 附录1：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第48-49页 |
| 附录2：MTHase的氨基酸序列比对 | 第49-51页 |