| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩略语 | 第8-10页 |
| 目录 | 第10-15页 |
| 第1章 前言 | 第15-37页 |
| 1.1 磺胺嘧啶简介 | 第15-17页 |
| 1.2 磺胺嘧啶的检测方法 | 第17-24页 |
| 1.2.1 理化分析法 | 第17-22页 |
| 1.2.2 免疫分析法 | 第22-23页 |
| 1.2.3 其它分析方法 | 第23-24页 |
| 1.3 人工抗体 | 第24-28页 |
| 1.3.1 分子印迹技术 | 第24页 |
| 1.3.2 分子印迹聚合物 | 第24-27页 |
| 1.3.3 分子印迹固相萃取 | 第27-28页 |
| 1.4 单链抗体 | 第28-35页 |
| 1.4.1 单链抗体的简介 | 第29-30页 |
| 1.4.2 单链抗体的表达系统 | 第30-31页 |
| 1.4.3 单链抗体体外亲和力成熟策略 | 第31-35页 |
| 1.5 研究目的及研究内容 | 第35-37页 |
| 第2章 磺胺嘧啶分子印迹聚合物的制备与特性分析 | 第37-50页 |
| 2.1 实验材料 | 第37-38页 |
| 2.1.1 化学试剂 | 第37-38页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第38页 |
| 2.2 实验方法 | 第38-41页 |
| 2.2.1 建立磺胺嘧啶浓度的测定方法 | 第38-39页 |
| 2.2.2 模板分子与功能单体相互作用的研究 | 第39页 |
| 2.2.3 磺胺嘧啶分子印迹聚合物的制备 | 第39-40页 |
| 2.2.4 磺胺嘧啶分子印迹聚合物特性的研究 | 第40-41页 |
| 2.3 结果与分析 | 第41-48页 |
| 2.3.1 模板分子与功能单体相互作用的研究 | 第41-44页 |
| 2.3.2 磺胺嘧啶分子印迹聚合物的制备 | 第44页 |
| 2.3.3 磺胺嘧啶分子印迹聚合物特性的研究 | 第44-48页 |
| 2.4 讨论 | 第48-49页 |
| 2.4.1 关于分子印迹技术中功能单体的分析 | 第48页 |
| 2.4.2 关于非共价法制备分子印迹聚合物的分析 | 第48-49页 |
| 2.5 小结 | 第49-50页 |
| 第3章 磺胺嘧啶分子印迹固相萃取柱的制备及应用 | 第50-62页 |
| 3.1 实验材料 | 第50-51页 |
| 3.1.1 化学试剂 | 第50页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第50-51页 |
| 3.2 实验方法 | 第51-53页 |
| 3.2.1 HPLC检测条件 | 第51页 |
| 3.2.2 MISPE柱的制备 | 第51页 |
| 3.2.3 MISPE柱萃取条件的研究 | 第51-52页 |
| 3.2.4 MISPE柱稳定性研究 | 第52页 |
| 3.2.5 样品提取与净化 | 第52页 |
| 3.2.6 MISPE柱萃取猪肉中磺胺嘧啶的色谱分析 | 第52页 |
| 3.2.7 建立检测猪肉中磺胺嘧啶MISPE柱-HPLC的方法 | 第52-53页 |
| 3.2.8 MISPE柱-HPLC检测猪肉样品中磺胺嘧啶的残量 | 第53页 |
| 3.3 结果与分析 | 第53-60页 |
| 3.3.1 MISPE柱萃取条件的研究 | 第53-56页 |
| 3.3.2 MISPE柱稳定性分析 | 第56页 |
| 3.3.3 MISPE柱萃取猪肉中磺胺嘧啶的色谱分析 | 第56-58页 |
| 3.3.4 建立检测猪肉中磺胺嘧啶MISPE柱-HPLC的方法 | 第58页 |
| 3.3.5 MISPE柱-HPLC检测猪肉样品中磺胺嘧啶的残量 | 第58-60页 |
| 3.4 讨论 | 第60-61页 |
| 3.4.1 关于分子印迹柱固相萃取的分析 | 第60页 |
| 3.4.2 关于MISPE柱-HPLC的分析 | 第60-61页 |
| 3.5 小结 | 第61-62页 |
| 第4章 磺胺嘧啶单克隆抗体可变区基因的克隆、单链抗体基因的构建与鉴定 | 第62-85页 |
| 4.1 实验材料 | 第62-65页 |
| 4.1.1 实验细胞株、菌种与质粒 | 第62页 |
| 4.1.2 培养基 | 第62-64页 |
| 4.1.3 主要试剂及仪器 | 第64-65页 |
| 4.2 实验方法 | 第65-76页 |
| 4.2.1 磺胺嘧啶单链抗体构建研究技术路线 | 第65-66页 |
| 4.2.2 引物的设计 | 第66-67页 |
| 4.2.3 磺胺嘧啶杂交瘤细胞的复苏与活性分析 | 第67-68页 |
| 4.2.4 磺胺嘧啶杂交瘤细胞总RNA的提取研究 | 第68页 |
| 4.2.5 磺胺嘧啶单链抗体基因的构建研究 | 第68-72页 |
| 4.2.6 pHEN1质粒的提取 | 第72页 |
| 4.2.7 pHEN-scFv载体构建与转化研究 | 第72-76页 |
| 4.2.8 磺胺嘧啶单链抗体序列及其生物信息学分析 | 第76页 |
| 4.3 结果与分析 | 第76-83页 |
| 4.3.1 磺胺嘧啶杂交瘤细胞总RNA提取研究 | 第76-77页 |
| 4.3.2 磺胺嘧啶单链抗体基因的构建研究 | 第77-78页 |
| 4.3.3 pHEN-scFv载体的构建及转化研究 | 第78-79页 |
| 4.3.4 磺胺嘧啶单链抗体序列及其生物信息学分析 | 第79-83页 |
| 4.4 讨论 | 第83-84页 |
| 4.5 小结 | 第84-85页 |
| 第5章 磺胺嘧啶单链抗体的原核表达及条件的优化 | 第85-108页 |
| 5.1 实验材料 | 第85-89页 |
| 5.1.1 实验细胞株、菌种与质粒 | 第85页 |
| 5.1.2 培养基 | 第85页 |
| 5.1.3 主要试剂及仪器 | 第85-87页 |
| 5.1.4 主要溶液的制备 | 第87-89页 |
| 5.2 实验方法 | 第89-95页 |
| 5.2.1 E.coli化转感受态细胞的制备 | 第89页 |
| 5.2.2 质粒的提取 | 第89页 |
| 5.2.3 表达载体pET22b-scFv的构建及转化研究 | 第89-91页 |
| 5.2.4 生物量的测定 | 第91页 |
| 5.2.5 scFv-SD诱导表达 | 第91-92页 |
| 5.2.6 SDS-PAGE电泳分析 | 第92-93页 |
| 5.2.7 scFv-SD诱导表达条件的优化 | 第93页 |
| 5.2.8 scFv-SD包涵体的变性、复性与纯化 | 第93-94页 |
| 5.2.9 Western blotting分析 | 第94页 |
| 5.2.10 scFv-SD生物活性分析 | 第94-95页 |
| 5.3 结果与分析 | 第95-106页 |
| 5.3.1 表达载体pET22b-scFv的构建及转化研究 | 第95-97页 |
| 5.3.2 重组菌株的生长曲线 | 第97-98页 |
| 5.3.3 scFv-SD的诱导表达 | 第98页 |
| 5.3.4 scFv-SD诱导表达条件的优化 | 第98-104页 |
| 5.3.5 scFv-SD包涵体变性、纯化与复性 | 第104页 |
| 5.3.6 Western blotting分析 | 第104-105页 |
| 5.3.7 scFv-SD生物活性分析 | 第105-106页 |
| 5.4 讨论 | 第106-107页 |
| 5.5 小结 | 第107-108页 |
| 第6章 磺胺嘧啶单链抗体基因在毕赤酵母中克隆与表达 | 第108-125页 |
| 6.1 实验材料 | 第108-111页 |
| 6.1.1 菌种和质粒 | 第108页 |
| 6.1.2 培养基 | 第108-110页 |
| 6.1.3 主要试剂及仪器 | 第110-111页 |
| 6.2 实验方法 | 第111-118页 |
| 6.2.1 磺胺嘧啶单链抗体基因在毕赤酵母中克隆与表达的技术路线 | 第111-112页 |
| 6.2.2 引物设计 | 第112页 |
| 6.2.3 磺胺嘧啶单链抗体基因的扩增研究 | 第112-113页 |
| 6.2.4 表达载体pPIC9K-SD的构建与转化研究 | 第113-115页 |
| 6.2.5 毕赤酵母GS115电转化研究 | 第115-117页 |
| 6.2.6 毕赤酵母重组子诱导表达研究 | 第117-118页 |
| 6.3 结果与分析 | 第118-123页 |
| 6.3.1 磺胺嘧啶单链抗体基因的扩增研究 | 第118-119页 |
| 6.3.2 表达载体pPIC9K-SD的构建与转化研究 | 第119-120页 |
| 6.3.3 毕赤酵母GS115电转化研究 | 第120-123页 |
| 6.3.4 毕赤酵母重组子的诱导表达研究 | 第123页 |
| 6.4 讨论 | 第123-124页 |
| 6.5 小结 | 第124-125页 |
| 第7章 磺胺嘧啶单链抗体随机突变文库的构建 | 第125-139页 |
| 7.1 实验材料 | 第125-127页 |
| 7.1.1 实验细胞株、菌种与质粒 | 第125页 |
| 7.1.2 培养基 | 第125页 |
| 7.1.3 主要试剂及仪器 | 第125-127页 |
| 7.2 实验方法 | 第127-133页 |
| 7.2.1 磺胺嘧啶单链抗体随机突变噬菌体文库构建的技术路线 | 第127页 |
| 7.2.2 质粒的提取 | 第127页 |
| 7.2.3 易错PCR体系优化研究 | 第127-128页 |
| 7.2.4 磺胺嘧啶单链抗体连续易错PCR研究 | 第128-129页 |
| 7.2.5 磺胺嘧啶单链抗体随机突变文库构建研究 | 第129-131页 |
| 7.2.6 磺胺嘧啶单链抗体随机突变噬菌体展示文库构建研究 | 第131-133页 |
| 7.3 结果与分析 | 第133-137页 |
| 7.3.1 易错PCR反应体系优化研究 | 第133页 |
| 7.3.2 磺胺嘧啶单链抗体连续易错PCR研究 | 第133-134页 |
| 7.3.3 磺胺嘧啶单链抗体随机突变文库构建研究 | 第134-137页 |
| 7.3.4 磺胺嘧啶单链抗体随机突变噬菌体展示文库构建研究 | 第137页 |
| 7.4 讨论 | 第137-138页 |
| 7.5 小结 | 第138-139页 |
| 第8章 结论与展望 | 第139-141页 |
| 8.1 结论 | 第139-140页 |
| 8.2 主要创新点 | 第140页 |
| 8.3 展望 | 第140-141页 |
| 致谢 | 第141-142页 |
| 参考文献 | 第142-157页 |
| 攻读博士学位期间研究成果 | 第157-158页 |
