| 中文摘要 | 第3-4页 |
| 英文摘要 | 第4-5页 |
| 缩略词 | 第9-10页 |
| 1 绪论 | 第10-18页 |
| 1.1 红曲霉概述 | 第10页 |
| 1.2 红曲霉的形态与结构 | 第10-11页 |
| 1.3 红曲霉的重要代谢特性及产物 | 第11页 |
| 1.4 酸性蛋白酶的应用 | 第11-12页 |
| 1.5 真菌酸性蛋白酶的酶学特性 | 第12-14页 |
| 1.5.1 酸性蛋白酶的基本酶学特性 | 第12-13页 |
| 1.5.2 国内外酸性蛋白酶研究现状 | 第13页 |
| 1.5.3 影响酸性蛋白酶产量的因素 | 第13-14页 |
| 1.6 丝状真菌遗传转化系统研究 | 第14-16页 |
| 1.6.1 丝状真菌的遗传转化方法 | 第14-15页 |
| 1.6.2 丝状真菌的强启动子 | 第15-16页 |
| 1.7 微生物发酵条件优化研究现状 | 第16页 |
| 1.8 本研究的内容和目的 | 第16-18页 |
| 1.8.1 本课题的研究目的 | 第16页 |
| 1.8.2 本课题的研究内容 | 第16-17页 |
| 1.8.3 技术路线 | 第17-18页 |
| 2 红曲霉酸性蛋白酶基因的序列特征及环境胁迫性研究 | 第18-38页 |
| 2.1 引言 | 第18页 |
| 2.2 实验材料及仪器 | 第18-20页 |
| 2.2.1 实验菌株 | 第18页 |
| 2.2.2 工具软件 | 第18-19页 |
| 2.2.3 主要试剂、配方及设备 | 第19-20页 |
| 2.3 实验方法 | 第20-24页 |
| 2.3.1 红曲霉Asp的克隆 | 第20-23页 |
| 2.3.2 Asp生物信息学分析 | 第23页 |
| 2.3.3 Asp环境胁迫性研究 | 第23-24页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第24-36页 |
| 2.4.1 Asp的克隆 | 第24-25页 |
| 2.4.2 家族和开放阅读框检验 | 第25页 |
| 2.4.3 红曲霉酸性蛋白酶基因Asp蛋白预测分析 | 第25-28页 |
| 2.4.4 信号肽预测 | 第28-29页 |
| 2.4.5 亲疏水性分析 | 第29页 |
| 2.4.6 跨膜结构域预测 | 第29-30页 |
| 2.4.7 激酶磷酸化修饰位点预测 | 第30-31页 |
| 2.4.8 功能位点预测 | 第31页 |
| 2.4.9 进化树构建 | 第31-32页 |
| 2.4.10 分子钟假说检验 | 第32-33页 |
| 2.4.11 Asp胁迫性分析 | 第33-36页 |
| 2.5 本章小结 | 第36-38页 |
| 3 Asp基因的同源表达研究 | 第38-54页 |
| 3.1 引言 | 第38页 |
| 3.2 实验材料及仪器 | 第38-40页 |
| 3.2.1 载体及菌株 | 第38页 |
| 3.2.2 主要试剂和配制 | 第38-40页 |
| 3.2.3 主要实验仪器 | 第40页 |
| 3.3 实验方法 | 第40-46页 |
| 3.3.1 重组载体的构建 | 第40-43页 |
| 3.3.2 根癌农杆菌介导转化红曲霉实验 | 第43-45页 |
| 3.3.3 转化子的性能分析 | 第45-46页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第46-52页 |
| 3.4.1 重组载体的构建 | 第46-48页 |
| 3.4.2 红曲霉转化子菌株的获得 | 第48-49页 |
| 3.4.3 红曲霉转化株酸性蛋白酶合成特性 | 第49-51页 |
| 3.4.4 转化子传代实验 | 第51-52页 |
| 3.5 本章小结 | 第52-54页 |
| 4 红曲霉酸性蛋白酶合成的液态发酵条件优化 | 第54-70页 |
| 4.1 引言 | 第54-55页 |
| 4.2 实验材料及仪器 | 第55-56页 |
| 4.2.1 主要试剂及配制 | 第55-56页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第56页 |
| 4.3 实验方法 | 第56-60页 |
| 4.3.1 制作酪氨酸浓度标准曲线 | 第56页 |
| 4.3.2 单因素变量液态发酵 | 第56-58页 |
| 4.3.3 响应面分析实验设计 | 第58-60页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第60-69页 |
| 4.4.1 酪氨酸浓度标准曲线 | 第60页 |
| 4.4.2 培养基配方单因素变量结果 | 第60-65页 |
| 4.4.3 响应面分析结果 | 第65-68页 |
| 4.4.4 红曲霉生长曲线和酸性蛋白酶曲线 | 第68-69页 |
| 4.5 本章小结 | 第69-70页 |
| 5 结论 | 第70-72页 |
| 6 后续工作展望 | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 附录 | 第82-84页 |
| A. 作者在攻读学位期间发表的论文目录 | 第82页 |
| B. 作者在攻读学位期间申请的专利 | 第82页 |
| C. ASP基因序列及其所编码的氨基酸 | 第82-83页 |
| D. 表达载体PBC-HYGRO图谱 | 第83页 |
| E. HPH基因序列 | 第83-84页 |
| F. 熔解曲线 | 第84页 |