植物酯酶的筛选纯化及其对农药敏感性的研究
| 文献综述 | 第1-30页 |
| 1. 我国农药残留污染现状 | 第11-12页 |
| 2. 食品中农药残留检测方法研究进展 | 第12-23页 |
| ·常规色谱仪器分析方法 | 第13-17页 |
| ·气相色谱分析 | 第13-15页 |
| ·气相色谱法(GC) | 第13-14页 |
| ·气相色谱-质谱联用法(GC-MS) | 第14-15页 |
| ·液相色谱 | 第15-17页 |
| ·高效液相色谱(HPLC) | 第15-16页 |
| ·液相色谱-质谱联用技术 | 第16-17页 |
| ·农药残留快速检测法 | 第17-23页 |
| ·酶联免疫法(ELISA) | 第18页 |
| ·酶抑制法 | 第18-23页 |
| ·比色法 | 第19-21页 |
| ·酶片法 | 第21-22页 |
| ·生物传感器法 | 第22-23页 |
| 3. 酯酶及其在农药残留快速检测中的应用 | 第23-28页 |
| ·酯酶及同工酶 | 第23-25页 |
| ·乙酰胆碱酯酶 | 第25-27页 |
| ·植物酯酶 | 第27-28页 |
| 4. 选题背景 | 第28-30页 |
| 正文 | 第30-66页 |
| 1. 引言 | 第30-31页 |
| 2. 材料与方法 | 第31-39页 |
| ·实验材料与主要生化试剂 | 第31页 |
| ·主要仪器与设备 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-39页 |
| ·酯酶活力测定方法 | 第32页 |
| ·试剂的配制 | 第32页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第32页 |
| ·酯酶活力测定 | 第32页 |
| ·植物酯酶对农药的灵敏度测定方法 | 第32-33页 |
| ·对不同农药检测限的确定 | 第33页 |
| ·农药残留检测用植物酯酶酶源的筛选 | 第33-34页 |
| ·植物种子预处理方法 | 第33页 |
| ·五种小麦总酯酶活力以及比活力比较 | 第33页 |
| ·大豆、玉米等植物种子中酯酶活力比较 | 第33页 |
| ·大豆、小麦种子与叶片中酯酶含量的比较 | 第33页 |
| ·大豆、陕麦28、小堰22对农药的灵敏性比较 | 第33-34页 |
| ·大豆粗酯酶对有机磷农药的最低检测限 | 第34页 |
| ·大豆酯酶提取条件的研究 | 第34-35页 |
| ·最佳提取料液比的研究 | 第34页 |
| ·振荡与搅拌效果比较 | 第34页 |
| ·最佳振荡时间的确定 | 第34页 |
| ·提取液放置过夜与否效果比较 | 第34页 |
| ·反应液显色稳定性研究 | 第34-35页 |
| ·大豆酯酶纯化条件的研究 | 第35-37页 |
| ·磷酸缓冲液提取方法 | 第35页 |
| ·离心方法的确定 | 第35页 |
| ·硫酸铵盐析沉淀 | 第35页 |
| ·超滤浓缩 | 第35-36页 |
| ·DEAE-32纯化 | 第36-37页 |
| ·大豆酯酶SDS-PAGE凝胶电泳 | 第37页 |
| ·大豆酯酶理化性质和动力学特性的研究 | 第37-39页 |
| ·大豆酯酶最适温度 | 第37页 |
| ·大豆酯酶的热稳定性 | 第37页 |
| ·大豆酯酶的最适pH值 | 第37页 |
| ·大豆酯酶的酸碱稳定性 | 第37页 |
| ·离子强度对酶活力的影响 | 第37页 |
| ·米氏常数(Km)的测定 | 第37-38页 |
| ·大豆酯酶保存特性的研究 | 第38页 |
| ·大豆酯酶分子量的测定 | 第38-39页 |
| ·大豆酯酶对农药灵敏性和最低检测限的研究 | 第39页 |
| ·大豆酯酶对农药加标回收率研究 | 第39页 |
| ·苹果加标方法 | 第39页 |
| ·丙酮提取农药标品的方法 | 第39页 |
| ·回收率计算方法 | 第39页 |
| ·变异系数(C.V.)计算 | 第39页 |
| 3. 结果与分析 | 第39-62页 |
| ·农药残留检测用植物酯酶酶源的筛选 | 第39-42页 |
| ·五种小麦总酯酶活力以及比活力比较 | 第39-40页 |
| ·大豆、玉米等植物种子中酯酶活力比较 | 第40页 |
| ·大豆、小麦种子与叶片中酯酶含量的比较 | 第40-41页 |
| ·大豆、陕麦28、小堰22对农药的灵敏性试验结果 | 第41页 |
| ·大豆中粗酯酶对有机磷农药的最低检测限 | 第41-42页 |
| ·小结 | 第42页 |
| ·大豆酯酶提取条件的研究 | 第42-45页 |
| ·最佳提取料液比的研究 | 第42-43页 |
| ·振荡与搅拌效果比较 | 第43页 |
| ·最佳振荡时间的确定 | 第43-44页 |
| ·提取液放置过夜与否效果比较 | 第44页 |
| ·反应液显色稳定性研究 | 第44-45页 |
| ·显色稳定性 | 第44-45页 |
| ·煮沸使酶失活对显色稳定性影响 | 第45页 |
| ·小结 | 第45页 |
| ·大豆酯酶纯化条件的研究 | 第45-51页 |
| ·磷酸缓冲液提取条件的研究 | 第45-48页 |
| ·摩尔浓度单因素试验 | 第45-46页 |
| ·pH值单因素试验 | 第46-47页 |
| ·磷酸缓冲液提取正交试验 | 第47-48页 |
| ·离心条件的确定 | 第48页 |
| ·高速冷冻离心 | 第48页 |
| ·差速离心 | 第48页 |
| ·硫酸铵盐析沉淀 | 第48-50页 |
| ·DE-32离子交换层析 | 第50-51页 |
| ·大豆酯酶SDS-PAGE凝胶电泳 | 第51页 |
| ·大豆酯酶纯化效果 | 第51-52页 |
| ·大豆酯酶理化性质和动力学特性的研究 | 第52-56页 |
| ·大豆酯酶的最适温度 | 第52页 |
| ·大豆酯酶的热稳定性 | 第52页 |
| ·大豆酯酶的最适pH值 | 第52页 |
| ·大豆酯酶的酸碱稳定性 | 第52-53页 |
| ·离子强度对酯酶活力的影响 | 第53页 |
| ·米氏常数(Km)的测定 | 第53-54页 |
| ·大豆酯酶保存特性的研究 | 第54-55页 |
| ·大豆酯酶分子量的测定 | 第55页 |
| ·小结 | 第55-56页 |
| ·大豆酯酶对农药灵敏性和最低检测限的研究 | 第56-61页 |
| ·大豆酯酶对农药加标回收率研究 | 第61-62页 |
| 4. 讨论 | 第62-64页 |
| ·关于酶源的筛选 | 第62页 |
| ·关于本方法最低检测限的确定 | 第62页 |
| ·关于植物酯酶的纯化 | 第62-63页 |
| ·关于本方法检测限和检测农药的种类 | 第63-64页 |
| 5. 结论 | 第64-66页 |
| ·筛选出了农药残留检测用适宜酯酶来源 | 第64页 |
| ·提出了大豆酯酶的提纯方法 | 第64页 |
| ·研究大豆酯酶的酶学特性 | 第64页 |
| ·建立了分光光度法测定药残留的方法 | 第64-65页 |
| ·研究了大豆酯酶对多种农药的灵敏性和最低检测限 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 攻读学位期间研究成果 | 第77页 |
