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海栖热袍菌xynB基因的克隆和表达、重组木聚糖酶的提纯及其酶学性质

中文摘要第1-7页
英文摘要第7-10页
英文略语与译名第10-11页
第一章 绪论第11-33页
 1.1 木聚糖和木聚糖酶第11-13页
 1.2 木聚糖酶的生化性质和底物特异性第13-14页
 1.3 嗜热菌耐热木聚糖酶第14-16页
 1.4 木聚糖酶基因的克隆和表达第16-19页
 1.5 木聚糖酶的催化机理第19-20页
 1.6 木聚糖酶的分子生物学研究进展第20-22页
 1.7 木聚糖酶的应用第22-23页
 1.8 研究的内容、目的和意义第23-33页
第二章 表达载体的构建、基因的克隆和表达第33-48页
 2.1 引言第33页
 2.2 材料和方法第33-38页
  2.2.1 主要仪器和试剂第33页
  2.2.2 菌株和质粒第33-35页
  2.2.3 引物设计第35-36页
  2.2.4 表达基因片段的PCR扩增第36页
  2.2.5 拓扑TA克隆第36页
  2.2.6 DNA的琼脂糖凝胶电泳第36页
  2.2.7 质粒的提纯第36-37页
  2.2.8 从琼脂糖凝胶中回收DNA第37页
  2.2.9 DNA序列测定第37页
  2.2.10 菌落PCR筛选转化子第37-38页
  2.2.11 亚克隆和xynB基因在大肠杆菌中的表达第38页
 2.3 结果与讨论第38-46页
  2.3.1 引物设计和表达载体的构建第38-41页
  2.3.2 PCR产物的分子克隆和DNA序列测定第41-42页
  2.3.3 基因的亚克隆和在大肠杆菌中的表达第42-44页
  2.3.4 木聚糖酶基因xynB的序列分析和同源性比较第44-46页
 2.4 小结第46-48页
第三章 木聚糖酶的提纯第48-60页
 3.1 引言第48-49页
 3.2 材料与方法第49-51页
  3.2.1 主要仪器和试剂第49页
  3.2.2 LB(Luria-Bertani)培养基的配制第49页
  3.2.3 培养与收获第49页
  3.2.4 热变性处理第49-50页
  3.2.5 亲和柱层析第50页
  3.2.6 离子交换柱层析第50页
  3.2.7 SDS-PAGE鉴定酶的纯度和测定酶的分子量第50-51页
  3.2.8 酶活力的标准测定方法第51页
 3.3 结果与讨论第51-58页
  3.3.1 粗酶液的热处理第51-52页
  3.3.2 亲和柱层析第52-53页
  3.3.3 离子交换柱层析第53-55页
  3.3.4 SDS-PAGE鉴定酶的纯度和测定酶的分子量第55-58页
 3.4 小结第58-60页
第四章 木聚糖酶的酶学性质第60-77页
 4.1 引言第60页
 4.2 材料和方法第60-62页
  4.2.1 主要试剂和仪器第60页
  4.2.2 蛋白质的定量第60页
  4.2.3 酶活力的标准测定方法第60-61页
  4.2.4 最适pH值和pH稳定性第61页
  4.2.5 最适温度和温度稳定性第61页
  4.2.6 金属离子和螯合剂(EDTA)对酶活力的影响第61页
  4.2.7 醇类对酶活力的影响第61-62页
  4.2.8 底物特异性和酶动力学参数的测定第62页
 4.3 结果与讨论第62-73页
  4.3.1 最适pH值和pH稳定性第62-64页
  4.3.2 最适温度和温度稳定性第64-66页
  4.3.3 金属离子和EDTA对酶活的影响第66页
  4.3.4 不同醇对酶活力的影响第66-68页
  4.3.5 底物特异性和酶的动力学参数第68-73页
 4.4 小结第73-77页
第五章 木聚糖酶的转糖苷化活性第77-89页
 5.1 引言第77页
 5.2 材料与方法第77-78页
  5.2.1 主要仪器和试剂第77页
  5.2.2 不同醇对木聚糖酶的转糖苷化的影响第77页
  5.2.3 不同醇对不同底物转糖苷化的影响第77-78页
  5.2.4 木聚糖酶的转糖苷化反应过程第78页
  5.2.5 薄层层析分析水解产物第78页
 5.3 结果与讨论第78-86页
  5.3.1 木聚糖酶的转糖苷化机理第78-79页
  5.3.2 不同醇对木聚糖酶的转糖苷化的影响第79-80页
  5.3.3 不同醇对不同底物转糖苷化的影响第80-83页
  5.3.4 木聚糖酶的转糖苷化反应过程第83-86页
 5.4 小结第86-89页
第六章 结论与建议第89-92页
 6.1 结论第89-91页
 6.2 建议第91-92页
致  谢第92页

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