中文摘要 | 第1-7页 |
英文摘要 | 第7-10页 |
英文略语与译名 | 第10-11页 |
第一章 绪论 | 第11-33页 |
1.1 木聚糖和木聚糖酶 | 第11-13页 |
1.2 木聚糖酶的生化性质和底物特异性 | 第13-14页 |
1.3 嗜热菌耐热木聚糖酶 | 第14-16页 |
1.4 木聚糖酶基因的克隆和表达 | 第16-19页 |
1.5 木聚糖酶的催化机理 | 第19-20页 |
1.6 木聚糖酶的分子生物学研究进展 | 第20-22页 |
1.7 木聚糖酶的应用 | 第22-23页 |
1.8 研究的内容、目的和意义 | 第23-33页 |
第二章 表达载体的构建、基因的克隆和表达 | 第33-48页 |
2.1 引言 | 第33页 |
2.2 材料和方法 | 第33-38页 |
2.2.1 主要仪器和试剂 | 第33页 |
2.2.2 菌株和质粒 | 第33-35页 |
2.2.3 引物设计 | 第35-36页 |
2.2.4 表达基因片段的PCR扩增 | 第36页 |
2.2.5 拓扑TA克隆 | 第36页 |
2.2.6 DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第36页 |
2.2.7 质粒的提纯 | 第36-37页 |
2.2.8 从琼脂糖凝胶中回收DNA | 第37页 |
2.2.9 DNA序列测定 | 第37页 |
2.2.10 菌落PCR筛选转化子 | 第37-38页 |
2.2.11 亚克隆和xynB基因在大肠杆菌中的表达 | 第38页 |
2.3 结果与讨论 | 第38-46页 |
2.3.1 引物设计和表达载体的构建 | 第38-41页 |
2.3.2 PCR产物的分子克隆和DNA序列测定 | 第41-42页 |
2.3.3 基因的亚克隆和在大肠杆菌中的表达 | 第42-44页 |
2.3.4 木聚糖酶基因xynB的序列分析和同源性比较 | 第44-46页 |
2.4 小结 | 第46-48页 |
第三章 木聚糖酶的提纯 | 第48-60页 |
3.1 引言 | 第48-49页 |
3.2 材料与方法 | 第49-51页 |
3.2.1 主要仪器和试剂 | 第49页 |
3.2.2 LB(Luria-Bertani)培养基的配制 | 第49页 |
3.2.3 培养与收获 | 第49页 |
3.2.4 热变性处理 | 第49-50页 |
3.2.5 亲和柱层析 | 第50页 |
3.2.6 离子交换柱层析 | 第50页 |
3.2.7 SDS-PAGE鉴定酶的纯度和测定酶的分子量 | 第50-51页 |
3.2.8 酶活力的标准测定方法 | 第51页 |
3.3 结果与讨论 | 第51-58页 |
3.3.1 粗酶液的热处理 | 第51-52页 |
3.3.2 亲和柱层析 | 第52-53页 |
3.3.3 离子交换柱层析 | 第53-55页 |
3.3.4 SDS-PAGE鉴定酶的纯度和测定酶的分子量 | 第55-58页 |
3.4 小结 | 第58-60页 |
第四章 木聚糖酶的酶学性质 | 第60-77页 |
4.1 引言 | 第60页 |
4.2 材料和方法 | 第60-62页 |
4.2.1 主要试剂和仪器 | 第60页 |
4.2.2 蛋白质的定量 | 第60页 |
4.2.3 酶活力的标准测定方法 | 第60-61页 |
4.2.4 最适pH值和pH稳定性 | 第61页 |
4.2.5 最适温度和温度稳定性 | 第61页 |
4.2.6 金属离子和螯合剂(EDTA)对酶活力的影响 | 第61页 |
4.2.7 醇类对酶活力的影响 | 第61-62页 |
4.2.8 底物特异性和酶动力学参数的测定 | 第62页 |
4.3 结果与讨论 | 第62-73页 |
4.3.1 最适pH值和pH稳定性 | 第62-64页 |
4.3.2 最适温度和温度稳定性 | 第64-66页 |
4.3.3 金属离子和EDTA对酶活的影响 | 第66页 |
4.3.4 不同醇对酶活力的影响 | 第66-68页 |
4.3.5 底物特异性和酶的动力学参数 | 第68-73页 |
4.4 小结 | 第73-77页 |
第五章 木聚糖酶的转糖苷化活性 | 第77-89页 |
5.1 引言 | 第77页 |
5.2 材料与方法 | 第77-78页 |
5.2.1 主要仪器和试剂 | 第77页 |
5.2.2 不同醇对木聚糖酶的转糖苷化的影响 | 第77页 |
5.2.3 不同醇对不同底物转糖苷化的影响 | 第77-78页 |
5.2.4 木聚糖酶的转糖苷化反应过程 | 第78页 |
5.2.5 薄层层析分析水解产物 | 第78页 |
5.3 结果与讨论 | 第78-86页 |
5.3.1 木聚糖酶的转糖苷化机理 | 第78-79页 |
5.3.2 不同醇对木聚糖酶的转糖苷化的影响 | 第79-80页 |
5.3.3 不同醇对不同底物转糖苷化的影响 | 第80-83页 |
5.3.4 木聚糖酶的转糖苷化反应过程 | 第83-86页 |
5.4 小结 | 第86-89页 |
第六章 结论与建议 | 第89-92页 |
6.1 结论 | 第89-91页 |
6.2 建议 | 第91-92页 |
致 谢 | 第92页 |