| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1 前言 | 第10-17页 |
| 1.1 酸性蛋白酶研究进展 | 第10-13页 |
| 1.1.1 酸性蛋白酶的种类 | 第10页 |
| 1.1.2 酸性蛋白酶的来源 | 第10页 |
| 1.1.3 酸性蛋白酶的性质 | 第10-11页 |
| 1.1.4 酸性蛋白酶的应用 | 第11-12页 |
| 1.1.5 国内外酸性蛋白酶研究进展 | 第12-13页 |
| 1.1.6 存在的问题及发展前景 | 第13页 |
| 1.2 毕赤酵母表达系统研究进展 | 第13-15页 |
| 1.3 课题研究目的与内容 | 第15-17页 |
| 1.3.1 研究目的与意义 | 第15-16页 |
| 1.3.2 研究内容与方法 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-22页 |
| 2.1.1 菌种与载体 | 第17页 |
| 2.1.2 酶与主要生化试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.3 常用试剂配置 | 第18-20页 |
| 2.1.4 培养基配置 | 第20-21页 |
| 2.1.5 主要实验仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.6 引物 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-36页 |
| 2.2.1 生物信息学分析 | 第22页 |
| 2.2.2 重组工程菌构建 | 第22-29页 |
| 2.2.3 重组菌株的验证与筛选 | 第29页 |
| 2.2.4 外源基因在毕赤酵母中诱导表达 | 第29页 |
| 2.2.5 蛋白质浓缩 | 第29-30页 |
| 2.2.6 福林-酚法测定酸性蛋白酶酶活 | 第30-31页 |
| 2.2.7 蛋白浓度测定 | 第31-32页 |
| 2.2.8 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白 | 第32-33页 |
| 2.2.9 重组毕赤酵母菌株遗传稳定性分析 | 第33页 |
| 2.2.10 重组毕赤酵母菌株摇瓶发酵条件优化 | 第33-34页 |
| 2.2.11 猪胃蛋白酶重组菌株在毕赤酵母中的发酵罐诱导表达 | 第34页 |
| 2.2.12 酸性蛋白酶酶学性质的测定 | 第34-36页 |
| 3 结果与讨论 | 第36-57页 |
| 3.1 重组工程菌的构建结果 | 第36-39页 |
| 3.2 米曲霉重组菌株的诱导表达 | 第39-40页 |
| 3.3 米曲霉重组酵母SDS-PAGE验证 | 第40页 |
| 3.4 米曲霉酸性蛋白酶重组毕赤酵母菌株遗传稳定性验证 | 第40-41页 |
| 3.5 米曲霉酸性蛋白酶重组酵母的摇瓶发酵条件优化 | 第41-44页 |
| 3.6 米曲酸性蛋白酶酶学性质分析 | 第44-45页 |
| 3.7 产猪胃蛋白酶重组工程菌的构建与筛选结果 | 第45-47页 |
| 3.8 猪胃蛋白酶重组毕赤酵母的表达验证 | 第47-48页 |
| 3.9 猪胃蛋白酶重组毕赤酵母菌株遗传稳定性验证 | 第48页 |
| 3.10 猪胃蛋白酶重组酵母的摇瓶发酵优化 | 第48-51页 |
| 3.11 PA高密度发酵初试 | 第51-52页 |
| 3.12 重组猪胃蛋白酶酶学性质分析 | 第52-54页 |
| 3.13 讨论 | 第54-57页 |
| 4 结论 | 第57-59页 |
| 4.1 米曲霉酸性蛋白酶在毕赤酵母中表达及酶学性质 | 第57页 |
| 4.2 猪胃蛋白酶在毕赤酵母中表达及酶学性质 | 第57-59页 |
| 5 展望 | 第59-60页 |
| 6 参考文献 | 第60-65页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第65-66页 |
| 8 致谢 | 第66-67页 |
| 附录 | 第67页 |
