| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 1 前言 | 第8-16页 |
| ·生物传感器及生物传感器用酶简介 | 第8-10页 |
| ·定义 | 第8页 |
| ·分类 | 第8-9页 |
| ·生物传感器的应用 | 第9页 |
| ·生物传感器用酶的研究现状 | 第9-10页 |
| ·半乳糖氧化酶的简介与应用 | 第10-12页 |
| ·半乳糖氧化酶的研究进展 | 第12-14页 |
| ·半乳糖氧化酶的生化属性 | 第12页 |
| ·半乳糖氧化酶的X射线晶体结构 | 第12-13页 |
| ·应用光谱学对半乳糖氧化酶催化机理的研究进展 | 第13-14页 |
| ·本论文主要研究内容 | 第14-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-35页 |
| ·实验材料 | 第16-20页 |
| ·实验菌株 | 第16页 |
| ·试剂盒和酶试剂 | 第16页 |
| ·主要试剂的配制 | 第16-18页 |
| ·实验仪器设备 | 第18-20页 |
| ·实验方法 | 第20-35页 |
| ·半乳糖氧化酶基因的克隆及其在大肠杆菌中表达与纯化 | 第20-29页 |
| ·半乳糖氧化酶的蛋白定量与酶活检测分析 | 第29-31页 |
| ·制备半乳糖氧化酶工艺上的优化 | 第31-35页 |
| 3 结果与讨论 | 第35-49页 |
| ·半乳糖氧化酶基因的克隆 | 第35-37页 |
| ·玉蜀黍赤霉菌总RNA的提取 | 第35页 |
| ·反转录获取半乳糖氧化酶基因 | 第35-36页 |
| ·半乳糖氧化酶表达载体pET32-Gao的构建和阳性克隆筛选 | 第36页 |
| ·半乳糖氧化酶的测序结果 | 第36-37页 |
| ·半乳糖氧化酶的纯化 | 第37-40页 |
| ·半乳糖氧化酶的诱导表达与纯化 | 第37-38页 |
| ·半乳糖氧化酶的His-tag免疫印迹检测 | 第38页 |
| ·半乳糖氧化酶的蛋白定量 | 第38-39页 |
| ·半乳糖氧化酶的酶活测定 | 第39-40页 |
| ·半乳糖氧化酶制备工艺的优化 | 第40-46页 |
| ·菌体生长曲线的测定 | 第41-43页 |
| ·半乳糖氧化酶Cys228-Tyr272定点突变 | 第43-45页 |
| ·半乳糖氧化酶制备工艺的优化 | 第45-46页 |
| ·NI-NTA亲和层析纯化对半乳糖氧化酶活性的影响 | 第46-49页 |
| 4 结论 | 第49-50页 |
| 5 展望 | 第50-51页 |
| 6 参考文献 | 第51-58页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第58-59页 |
| 8 致谢 | 第59页 |
