环糊精糖基转移酶和羰基还原酶基因表达及酶学性质研究
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 1 前言 | 第11-23页 |
| ·生物催化概述 | 第11页 |
| ·生物催化定义及优点 | 第11页 |
| ·环糊精 | 第11-15页 |
| ·环糊精的分类及现状 | 第11页 |
| ·环糊精的结构及性质 | 第11-13页 |
| ·环糊精的应用 | 第13-15页 |
| ·环糊精糖基转移酶 | 第15-20页 |
| ·环糊精糖基转移酶功能及其作用机理 | 第15-17页 |
| ·微生物中的CGTase | 第17-18页 |
| ·CGTase的应用 | 第18-20页 |
| ·羰基还原酶 | 第20-21页 |
| ·羰基还原酶及其分类 | 第20页 |
| ·羰基还原酶的应用 | 第20-21页 |
| ·本论文的目的、意义和主要内容 | 第21-23页 |
| ·研究目的和意义 | 第21页 |
| ·本课题的主要研究内容 | 第21-23页 |
| 2 材料和方法 | 第23-39页 |
| ·实验材料与仪器 | 第23-27页 |
| ·土壤样品及质粒 | 第23页 |
| ·主要实验试剂 | 第23-24页 |
| ·主要仪器 | 第24-26页 |
| ·实验中用到的培养基 | 第26页 |
| ·试验中用的存储液的配制 | 第26-27页 |
| ·感受态的制备 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-35页 |
| ·产CGTase菌株的筛选 | 第27-29页 |
| ·菌种的保藏 | 第29页 |
| ·菌种鉴定 | 第29-30页 |
| ·粗酶液的制备 | 第30-31页 |
| ·酶活测定 | 第31页 |
| ·V2-1生长曲线的测定 | 第31页 |
| ·基因克隆 | 第31-33页 |
| ·工程菌构建 | 第33-34页 |
| ·目的蛋白表达 | 第34页 |
| ·蛋白纯化 | 第34-35页 |
| ·羰基还原酶目的基因的分析及克隆 | 第35-39页 |
| ·目的基因序列的获取 | 第35页 |
| ·目的基因的克隆 | 第35页 |
| ·目的基因的表达 | 第35-36页 |
| ·蛋白纯化 | 第36页 |
| ·酶学性质测定 | 第36页 |
| ·底物谱的测定 | 第36-39页 |
| 3 结果与讨论 | 第39-61页 |
| ·环糊精糖基转移酶菌株的筛选及野生菌的初步研究 | 第39-45页 |
| ·菌种筛选及酶活测定 | 第39-42页 |
| ·菌株V2-1的形态学分析 | 第42-45页 |
| ·菌种V2-1生长催化特性研究 | 第45页 |
| ·目的基因(cgtV2-1)的克隆、表达及纯化 | 第45-52页 |
| ·基因cgtV2-1的克隆 | 第45-49页 |
| ·工程菌的构建 | 第49页 |
| ·目的蛋白的表达 | 第49-50页 |
| ·酶活测定 | 第50-51页 |
| ·N端信号肽的初步研究 | 第51-52页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第52-54页 |
| ·Ni-NTA纯化 | 第52-53页 |
| ·其它层析柱纯化 | 第53-54页 |
| ·羰基还原酶PPCR的克隆、表达与纯化 | 第54-55页 |
| ·目的基因ppcr的克隆 | 第54页 |
| ·目的蛋白PPCR的表达和纯化 | 第54-55页 |
| ·PPCR的酶学性质测定 | 第55-57页 |
| ·分子量测定 | 第55页 |
| ·最适pH的测定 | 第55-56页 |
| ·最适反应温度及温度稳定性的研究 | 第56-57页 |
| ·动力学参数的测定 | 第57页 |
| ·PPCR的底物谱的测定 | 第57-61页 |
| ·PPCR对醛的活性 | 第57-58页 |
| ·PPCR对α-酮酯的活性 | 第58页 |
| ·PPCR对β-酮酯的活性 | 第58-59页 |
| ·PPCR对芳香酮的活性 | 第59-61页 |
| 4 结论 | 第61-63页 |
| 5 展望 | 第63-65页 |
| 6 参考文献 | 第65-73页 |
| 7 论文发表情况 | 第73-75页 |
| 8 致谢 | 第75-77页 |
| 9 附录 | 第77-78页 |
