| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-28页 |
| ·冷适微生物的生态分布及主要研究领域 | 第12-15页 |
| ·冷适微生物的概念和范畴 | 第12页 |
| ·冷适微生物的生态分布及生态作用 | 第12-14页 |
| ·冷适微生物的种类 | 第14页 |
| ·冷适微生物的主要研究领域 | 第14-15页 |
| ·冷适微生物的适冷机制 | 第15-17页 |
| ·细胞壁组分 | 第15页 |
| ·膜通透性及流动性 | 第15页 |
| ·膜蛋白和脂多糖 | 第15-16页 |
| ·tRNA 的转录后修饰 | 第16页 |
| ·蛋白质合成 | 第16页 |
| ·冷休克蛋白 | 第16-17页 |
| ·冷适酶类 | 第17页 |
| ·冷适酶高效催化机制及结构上的特性 | 第17-20页 |
| ·冷适酶的催化特性 | 第17-19页 |
| ·冷适酶结构上的柔韧性 | 第19页 |
| ·冷适酶的序列特征 | 第19页 |
| ·冷适酶的热不稳定性 | 第19-20页 |
| ·冷适酶的冷适应机制 | 第20页 |
| ·蛋白酶分类体系和作用特点 | 第20-22页 |
| ·外肽酶和内肽酶 | 第20-21页 |
| ·丝氨酸蛋白酶 | 第21页 |
| ·天冬氨酸蛋白酶 | 第21页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶 | 第21-22页 |
| ·金属蛋白酶 | 第22页 |
| ·冷适蛋白酶研究现状、存在不足和应用前景 | 第22-27页 |
| ·冷适蛋白酶的研究现状 | 第22-25页 |
| ·冷适蛋白酶研究存在的不足 | 第25-26页 |
| ·冷适蛋白酶的应用现状和前景 | 第26-27页 |
| ·本论文的研究目的及意义 | 第27-28页 |
| 第二章 产冷适蛋白酶耐冷菌的筛选及鉴定 | 第28-41页 |
| ·材料和方法 | 第28-32页 |
| ·样品来源 | 第28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·主要仪器及设备 | 第28-29页 |
| ·主要试剂 | 第29页 |
| ·蛋白酶酶活测定 | 第29-30页 |
| ·产蛋白酶菌株筛选 | 第30页 |
| ·菌体光密度测定 | 第30页 |
| ·菌株生长特性及生理生化试验 | 第30-31页 |
| ·16s rDNA 序列测定 | 第31页 |
| ·菌株鉴定及系统发育树构建 | 第31-32页 |
| ·结果与分析 | 第32-38页 |
| ·产酶菌株的初筛和分离 | 第32页 |
| ·菌株形态观察及染色实验 | 第32-33页 |
| ·摇瓶复筛和粗酶催化特性 | 第33-34页 |
| ·SYP A2-3 电镜观察 | 第34页 |
| ·SYP A2-3 生理生化特征 | 第34-35页 |
| ·菌株鉴定 | 第35-37页 |
| ·16s rDNA 比对及系统发育树构建 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| ·关于蜡状芽孢杆菌与苏云金杆菌的鉴别 | 第38-39页 |
| ·蜡状芽孢杆菌冷适性研究情况 | 第39页 |
| ·蜡状芽孢杆菌蛋白酶研究概况 | 第39-40页 |
| ·本章主要结论 | 第40-41页 |
| 第三章 Bacillus cereus SYP A2-3 产冷适蛋白酶的条件研究 | 第41-55页 |
| ·材料和方法 | 第41-43页 |
| ·培养基 | 第41页 |
| ·基本培养方法 | 第41页 |
| ·发酵产酶研究 | 第41-42页 |
| ·菌体生物量及菌体得率 | 第42页 |
| ·发酵液酶谱电泳 | 第42-43页 |
| ·变温培养 | 第43页 |
| ·结果与分析 | 第43-51页 |
| ·摇瓶种子生长曲线和接种时间 | 第43页 |
| ·接种量对菌体生长和产酶影响 | 第43页 |
| ·温度对发酵产酶的影响 | 第43-46页 |
| ·发酵产酶对溶氧的需求 | 第46-47页 |
| ·培养基pH 对发酵产酶的影响 | 第47-50页 |
| ·碳源对发酵产酶的影响 | 第50页 |
| ·氮源对发酵产酶的影响 | 第50-51页 |
| ·产酶过程中酶的保护 | 第51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| ·培养温度的选择 | 第51页 |
| ·温度对产酶行为的调控 | 第51-52页 |
| ·碳源阻遏现象和对糖利用特点 | 第52-53页 |
| ·氮源聚合度对产酶的影响 | 第53页 |
| ·酶的稳定性和保护 | 第53页 |
| ·本章主要结论 | 第53-55页 |
| 第四章 氮源对Bacillus cereus SYP A2-3 产冷适蛋白酶的影响及其调控的初步研究 | 第55-68页 |
| ·材料和方法 | 第55-57页 |
| ·材料和仪器 | 第55页 |
| ·不同水解度酪蛋白的制备 | 第55页 |
| ·酪蛋白肽的分离 | 第55-56页 |
| ·分子量分布测定 | 第56页 |
| ·诱导产酶实验 | 第56页 |
| ·氮源补加实验 | 第56页 |
| ·产酶速率测定 | 第56-57页 |
| ·α-氨基氮测定 | 第57页 |
| ·芽孢计数和形态观察 | 第57页 |
| ·粗料氮源的预水解发酵实验 | 第57页 |
| ·结果与分析 | 第57-64页 |
| ·不同水解度酪蛋白肽的制备 | 第57-58页 |
| ·不同水解程度酪蛋白肽对发酵产酶影响 | 第58页 |
| ·不同分子量分布的酪蛋白肽对胞外蛋白酶的诱导 | 第58-59页 |
| ·发酵过程中α-氨基氮水平的变化 | 第59-60页 |
| ·发酵过程中胞外物质分子量分布 | 第60-62页 |
| ·补加氮源对发酵产酶速率的影响 | 第62页 |
| ·粗料氮源预水解处理与发酵产酶 | 第62-63页 |
| ·小罐发酵的优化控制 | 第63-64页 |
| ·讨论 | 第64-67页 |
| ·SYP A2-3 蛋白酶诱导机制 | 第64-65页 |
| ·芽孢形成与产酶的关系 | 第65-66页 |
| ·产酶控制策略 | 第66-67页 |
| ·本章主要结论 | 第67-68页 |
| 第五章 冷适蛋白酶的分离纯化和酶学性质研究 | 第68-81页 |
| ·材料和方法 | 第68-71页 |
| ·材料和仪器 | 第68页 |
| ·缓冲液 | 第68页 |
| ·粗酶制备 | 第68-69页 |
| ·离子交换层析 | 第69-70页 |
| ·凝胶层析 | 第70页 |
| ·纯度及活性检测方法 | 第70页 |
| ·酶学性质实验 | 第70-71页 |
| ·结果与分析 | 第71-78页 |
| ·发酵液超滤浓缩 | 第71页 |
| ·硫酸铵盐析 | 第71-72页 |
| ·离子交换层析 | 第72-74页 |
| ·凝胶层析 | 第74-75页 |
| ·回收率和纯化倍数 | 第75-76页 |
| ·BcNP 的酶学性质研究 | 第76-78页 |
| ·讨论 | 第78-80页 |
| ·BcNP 纯化过程中不稳定因素 | 第78-79页 |
| ·BcNP 纯化的技术措施 | 第79页 |
| ·影响BcNP 纯化收率的主要因素 | 第79-80页 |
| ·BcNP 催化作用的冷适性 | 第80页 |
| ·本章主要结论 | 第80-81页 |
| 第六章 BcNP 的稳定性和冷适应性研究 | 第81-94页 |
| ·材料和方法 | 第81-82页 |
| ·稳定性研究 | 第81页 |
| ·紫外吸收光谱测定 | 第81页 |
| ·荧光发射光谱测定 | 第81页 |
| ·酶反应动力学常数测定 | 第81-82页 |
| ·结果与分析 | 第82-92页 |
| ·BcNP 的热稳定性 | 第82页 |
| ·Ca~(2+)对BcNP 稳定性影响 | 第82-83页 |
| ·低分子量醇类对BcNP 稳定性的影响 | 第83页 |
| ·低分子量醇类对酶活性的影响 | 第83-84页 |
| ·低分子量醇类的添加对BcNP 紫外光谱的影响 | 第84-85页 |
| ·低分子量醇类物质的添加对BcNP 荧光光谱影响 | 第85-87页 |
| ·稳态理论对酶反应动力学方程的推导 | 第87-88页 |
| ·不同温度下酶反应动力学常数测定 | 第88-90页 |
| ·BcNP 在不同温度下的催化效能 | 第90页 |
| ·酶反应热力学数据分析 | 第90-92页 |
| ·讨论 | 第92-93页 |
| ·稳定性保护的机制和限制性 | 第92页 |
| ·有机溶剂对酶特性的影响 | 第92-93页 |
| ·本章主要结论 | 第93-94页 |
| 第七章 冷适蛋白酶BcNP 同源建模和构效关系研究 | 第94-109页 |
| ·材料和方法 | 第94-95页 |
| ·材料 | 第94页 |
| ·N-端测序 | 第94页 |
| ·引物设计和合成 | 第94页 |
| ·DNA 提取和BcNP 基因的扩增、测序 | 第94-95页 |
| ·BcNP 序列推定和序列分析 | 第95页 |
| ·同源建模和结构评价的主要数据平台和工具软件 | 第95页 |
| ·结果与分析 | 第95-107页 |
| ·N-端测序和BcNP 序列 | 第95-96页 |
| ·BcNP 的一级结构特点 | 第96-98页 |
| ·BcNP 二级结构预测 | 第98页 |
| ·BcNP 三级结构预测 | 第98-103页 |
| ·BcNP 与1NPC 结构上的区别 | 第103-107页 |
| ·讨论 | 第107页 |
| ·同源模型的合理性和真实性 | 第107页 |
| ·BcNP 结构上的柔韧性和不稳定 | 第107页 |
| ·本章主要结论 | 第107-109页 |
| 论文的主要结论、展望和创新点 | 第109-111页 |
| 1. 论文主要结论 | 第109-110页 |
| 2. 论文主要创新点 | 第110页 |
| 3. 论文工作的不足及今后工作的展望 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-125页 |
| 已发表论文 | 第125-126页 |
| 致谢 | 第126-127页 |
| 独创性声明 | 第127页 |
| 学位论文版权使用授权书 | 第127页 |
