| 致谢 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 目录 | 第12-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-35页 |
| ·重组大肠杆菌的构建 | 第15-17页 |
| ·大肠杆菌和重组大肠杆菌 | 第15页 |
| ·重组大肠杆菌合成产物的类型及特点 | 第15-16页 |
| ·重组大肠杆菌高效表达体系的建立 | 第16-17页 |
| ·微生物生产嘌呤核苷磷酸化酶的研究进展 | 第17-21页 |
| ·嘌呤核苷磷酸化酶性质 | 第17-18页 |
| ·嘌呤苷磷酸化酶的用途 | 第18-19页 |
| ·微生物生产嘌呤核苷磷酸化酶的研究进展 | 第19-20页 |
| ·嘌呤核苷磷酸化酶合成核苷类药物的研究进展 | 第20-21页 |
| ·微生物生产L-色氨酸的研究进展 | 第21-33页 |
| ·L-色氨酸的理化性质和用途 | 第21-23页 |
| ·L-色氨酸的基本生产方法 | 第23-24页 |
| ·直接发酵法生产L-色氨酸的研究进展 | 第24-33页 |
| ·本文研究思路及主要研究内容 | 第33-35页 |
| 第二章 嘌呤核苷磷酸化酶的克隆和高效表达 | 第35-51页 |
| ·引言 | 第35-36页 |
| ·材料和方法 | 第36-42页 |
| ·菌株和质粒 | 第36页 |
| ·实验仪器及试剂 | 第36页 |
| ·培养基和培养条件 | 第36-38页 |
| ·大肠杆菌MG1665基因组提取 | 第38-39页 |
| ·质粒DNA提取及转化 | 第39页 |
| ·引物设及目的基因克隆 | 第39-40页 |
| ·克隆载体的构建 | 第40页 |
| ·表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·嘌呤核苷磷酸化酶的表达 | 第41页 |
| ·分析测定方法 | 第41-42页 |
| ·结果与讨论 | 第42-50页 |
| ·嘌呤核苷磷酸化酶基因的克隆 | 第42-43页 |
| ·嘌呤核苷磷酸化酶酶活测定条件的确定 | 第43-45页 |
| ·嘌呤核苷磷酸化酶表达条件优化 | 第45-49页 |
| ·嘌呤核苷磷酸化酶的底物特异性研究 | 第49-50页 |
| ·小结 | 第50-51页 |
| 第三章 重组嘌呤核苷磷酸化酶细胞固定化及其应用 | 第51-69页 |
| ·引言 | 第51页 |
| ·材料和方法 | 第51-55页 |
| ·菌株 | 第51-52页 |
| ·实验仪器及试剂 | 第52页 |
| ·培养基及培养条件 | 第52页 |
| ·细胞固定化 | 第52-53页 |
| ·嘌呤核苷磷酸化酶的活力测定 | 第53页 |
| ·游离和固定化细胞酶促反应动力学 | 第53-54页 |
| ·游离和固定化细胞的酶活稳定性分析 | 第54页 |
| ·利巴韦林生物合成 | 第54-55页 |
| ·数据统计学分析 | 第55页 |
| ·结果与讨论 | 第55-68页 |
| ·固定化载体的选择 | 第55-56页 |
| ·固定化载体浓度的确定 | 第56页 |
| ·摇床转速对固定化细胞酶活力的影响 | 第56-57页 |
| ·游离和固定化细胞的最佳催化条件 | 第57-58页 |
| ·稳态动力学分析 | 第58-61页 |
| ·固定化对重组PNPase稳定性的影响 | 第61-62页 |
| ·利巴韦林生物合成 | 第62-68页 |
| ·小结 | 第68-69页 |
| 第四章 重组大肠杆菌生产L-色氨酸的发酵条件研究 | 第69-87页 |
| ·引言 | 第69-70页 |
| ·材料和方法 | 第70-72页 |
| ·菌种 | 第70页 |
| ·主要仪器 | 第70-71页 |
| ·培养基(g/L) | 第71页 |
| ·菌种培养及发酵 | 第71-72页 |
| ·分析测定方法 | 第72页 |
| ·结果与讨论 | 第72-84页 |
| ·摇瓶种子培养基成份优化 | 第72-74页 |
| ·摇瓶种子培养条件优化 | 第74-76页 |
| ·发酵培养基成份初步优化 | 第76-78页 |
| ·发酵条件优化 | 第78-79页 |
| ·不同流加发酵方式对发酵结果的影响 | 第79-84页 |
| ·小结 | 第84-87页 |
| 第五章 外加添加剂对L-色氨酸发酵产率和合成代谢流的影响 | 第87-105页 |
| ·引言 | 第87-88页 |
| ·材料和方法 | 第88-89页 |
| ·菌种 | 第88页 |
| ·主要仪器 | 第88页 |
| ·培养基(g/L) | 第88页 |
| ·菌种培养及发酵 | 第88页 |
| ·添加剂选择及浓度确定 | 第88-89页 |
| ·分析测定方法 | 第89页 |
| ·代谢流量计算 | 第89页 |
| ·结果和讨论 | 第89-102页 |
| ·添加剂选择 | 第89-90页 |
| ·Tween族表面活性剂对L-色氨酸生物合成的影响 | 第90-91页 |
| ·Tween 60添加量的确定 | 第91-92页 |
| ·Tween 60添加时间的确定 | 第92-93页 |
| ·流加过程中添加剂对L-色氨酸合成的影响 | 第93-95页 |
| ·大肠杆菌中L-色氨酸生物合成的代谢网络图 | 第95-96页 |
| ·代谢流量平衡模型的构建 | 第96-99页 |
| ·添加剂触发的代谢流量再分布 | 第99-100页 |
| ·主要节点代谢流量分析 | 第100-102页 |
| ·小结 | 第102-105页 |
| 第六章 L-色氨酸分离纯化工艺的研究 | 第105-131页 |
| ·引言 | 第105页 |
| ·材料和方法 | 第105-110页 |
| ·主要仪器 | 第105-106页 |
| ·主要材料与试剂 | 第106页 |
| ·L-色氨酸除菌发酵液脱色方法 | 第106-107页 |
| ·离子交换树脂使用前的处理方法 | 第107页 |
| ·离子交换法静态吸附实验 | 第107-109页 |
| ·离子交换法动态吸附与洗脱实验 | 第109页 |
| ·分析测定方法 | 第109-110页 |
| ·结果与讨论 | 第110-129页 |
| ·L-色氨酸分离提取的工艺流程 | 第110-111页 |
| ·L-色氨酸发酵液脱色 | 第111页 |
| ·离子交换法分离提取L-色氨酸的研究 | 第111-127页 |
| ·L-色氨酸的结晶工艺研究 | 第127-129页 |
| ·L-色氨酸提取回收率及纯度 | 第129页 |
| ·小结 | 第129-131页 |
| 第七章 结论与展望 | 第131-135页 |
| ·主要研究结论 | 第131-133页 |
| ·建议与展望 | 第133-135页 |
| 参考文献 | 第135-149页 |
| 作者简介 | 第149-150页 |