| 致谢 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 目录 | 第11-14页 |
| 缩略词 | 第14-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-34页 |
| ·脱卤酶简介 | 第15-16页 |
| ·脱卤酶的起源 | 第15页 |
| ·脱卤酶的分类 | 第15-16页 |
| ·2-卤代酸脱卤酶的研究进展 | 第16-20页 |
| ·RS-2-卤代酸脱卤酶 | 第16-18页 |
| ·R-2-卤代酸脱卤酶 | 第18-20页 |
| ·S-2-卤代酸脱卤酶 | 第20页 |
| ·3-卤代酸脱卤酶的研究进展 | 第20-23页 |
| ·卤代酸脱卤酶的研究方法的进展 | 第23-26页 |
| ·新卤代酸脱卤酶基因的筛选 | 第23-24页 |
| ·脱卤酶的定向进化及理性设计 | 第24-26页 |
| ·脱卤酶的应用 | 第26-32页 |
| ·环境冶理 | 第26-27页 |
| ·S-2-氯丙酸的制备 | 第27-30页 |
| ·羟基酸的制备 | 第30-31页 |
| ·其他 | 第31-32页 |
| ·本课题的研究思路和主要内容 | 第32-34页 |
| ·研究思路 | 第32页 |
| ·研究内容 | 第32-34页 |
| 第二章 卤代酸脱卤酶菌株的高通量筛选及产物验证 | 第34-52页 |
| ·引言 | 第34页 |
| ·材料和方法 | 第34-39页 |
| ·试剂 | 第34页 |
| ·仪器 | 第34页 |
| ·培养基 | 第34-35页 |
| ·培养方法 | 第35页 |
| ·筛选方法 | 第35-37页 |
| ·卤代酸及产物测定方法 | 第37页 |
| ·菌属类鉴定方法 | 第37-38页 |
| ·液质分析方法 | 第38页 |
| ·粗酶抽提方法 | 第38-39页 |
| ·酶活测定 | 第39页 |
| ·β-羰基链烷酸显色法 | 第39页 |
| ·结果与讨论 | 第39-50页 |
| ·高通量筛选方法的建立 | 第39-40页 |
| ·产R-2-卤代酸脱卤酶菌株的筛选 | 第40-45页 |
| ·产氯乙酸脱卤酶菌株的选育 | 第45-47页 |
| ·产3-氯丙酸脱卤酶菌株的筛选 | 第47-50页 |
| ·本章小结 | 第50-52页 |
| 第三章 R-2-卤代酸脱卤酶的克隆表达及分子模拟 | 第52-83页 |
| ·引言 | 第52-53页 |
| ·材料和方法 | 第53-62页 |
| ·仪器、试剂、菌种、质粒及培养条件 | 第53-54页 |
| ·简并PCR获得部分序列 | 第54-55页 |
| ·染色体步移法获得R-2-卤代酸脱卤酶的完整基因 | 第55-56页 |
| ·dehDⅣ和dehDⅣ-R的克隆 | 第56-59页 |
| ·DehDⅣ和DehDⅣ-R的表达及纯化 | 第59-61页 |
| ·DehDⅣ和DehDⅣ-R的同源模建及分子对接研究 | 第61-62页 |
| ·结果与讨论 | 第62-81页 |
| ·R-2-卤代酸脱卤酶基因部分序列的获得 | 第62-65页 |
| ·染色体步移法获得R-2-卤代酸脱卤酶的两端序列 | 第65-67页 |
| ·DehDⅣ和DehDⅣ-R的克隆及表达纯化 | 第67-73页 |
| ·rDehDⅣ-R酶学性质研究 | 第73-76页 |
| ·DehDⅣ和DehDⅣ-R的同源模建 | 第76-79页 |
| ·DehDⅣ-R与底物2-CPA的分子对接研究 | 第79页 |
| ·DehDⅣ-R突变酶与底物R-2-氯丙酸和S-2-氯丙酸的分子对接 | 第79-81页 |
| ·本章小结 | 第81-83页 |
| 第四章 氯乙酸脱卤酶的克隆表达及分子模拟 | 第83-97页 |
| ·引言 | 第83页 |
| ·材料和方法 | 第83页 |
| ·结果与讨论 | 第83-96页 |
| ·氯乙酸脱卤酶基因的克隆 | 第83-84页 |
| ·重组氯乙酸脱卤酶的表达 | 第84-88页 |
| ·重组氯乙酸脱卤酶的纯化 | 第88页 |
| ·重组氯乙酸脱卤酶的酶学性考察 | 第88-91页 |
| ·氯乙酸脱卤酶的同源模建 | 第91-93页 |
| ·分子对接预测DehⅡ-S的底物选择性 | 第93-96页 |
| ·本章小结 | 第96-97页 |
| 第五章 3-氯丙酸脱卤酶基因筛选、克隆表达及分子模拟 | 第97-112页 |
| ·引言 | 第97页 |
| ·材料与方法 | 第97-102页 |
| ·试剂,菌种,材料与方法 | 第97-98页 |
| ·文库构建方法 | 第98-101页 |
| ·亚克隆 | 第101页 |
| ·稀有密码子分析 | 第101-102页 |
| ·不正确折叠分析 | 第102页 |
| ·结果与讨论 | 第102-111页 |
| ·质粒文库的构建 | 第102-105页 |
| ·3-氯丙酸脱卤酶的克隆及表达纯化 | 第105-107页 |
| ·rDehⅢ的酶学性质 | 第107-108页 |
| ·DehⅢ的同源模建及分子对接研究 | 第108-111页 |
| ·本章小结 | 第111-112页 |
| 第六章 C2/C3卤代酸脱卤酶的应用初步探索 | 第112-124页 |
| ·引言 | 第112-113页 |
| ·材料和方法 | 第113页 |
| ·2-CPA的对映体分析 | 第113页 |
| ·结果和讨论 | 第113-122页 |
| ·rDehDⅣ-R拆分2-CPA制备S-2-CPA | 第113-116页 |
| ·氯乙酸脱卤酶用于氯乙酸脱卤制备羟基乙酸 | 第116-121页 |
| ·3-氯丙酸脱卤酶用于3-羟基丙酸的制备 | 第121-122页 |
| ·本章小结 | 第122-124页 |
| 第七章 结论与展望 | 第124-128页 |
| ·结论 | 第124-126页 |
| ·R-2-卤代酸脱卤酶 | 第124-125页 |
| ·氯乙酸脱卤酶 | 第125-126页 |
| ·3-氯丙酸脱卤酶 | 第126页 |
| ·建议和展望 | 第126-128页 |
| 参考文献 | 第128-138页 |
| 附录 | 第138-146页 |
| 作者简介及研究成果 | 第146-147页 |
