| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第10-19页 |
| 1.1 木质纤维素 | 第10-11页 |
| 1.1.1 纤维素 | 第10-11页 |
| 1.1.2 半纤维素 | 第11页 |
| 1.1.3 木质素 | 第11页 |
| 1.2 木质纤维素降解酶 | 第11-13页 |
| 1.2.1 纤维素酶 | 第11-12页 |
| 1.2.2 半纤维素酶 | 第12页 |
| 1.2.3 木质素酶 | 第12页 |
| 1.2.4 木质纤维素降解中的辅助蛋白 | 第12-13页 |
| 1.3 裂解性多糖单加氧酶(LPMO) | 第13-16页 |
| 1.3.1 AA9 | 第14-15页 |
| 1.3.2 AA10 | 第15-16页 |
| 1.3.3 AA11和AA13 | 第16页 |
| 1.4 蛋白结构功能域的研究 | 第16页 |
| 1.5 蛋白质的N-糖基化 | 第16-17页 |
| 1.6 课题的立题背景和研究内容 | 第17-19页 |
| 1.6.1 立题背景 | 第17页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第17-19页 |
| 2 材料和方法 | 第19-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-22页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第19页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第19页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.4 常用培养基和主要溶液 | 第20-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-30页 |
| 2.2.1 黑曲霉的活化培养与总RNA提取 | 第22页 |
| 2.2.2 RNA反转录 | 第22页 |
| 2.2.3 目的基因的获得 | 第22-24页 |
| 2.2.4 重组质粒的构建 | 第24页 |
| 2.2.5 毕赤酵母的转化与诱导表达 | 第24-25页 |
| 2.2.6 目的蛋白的纯化与分析 | 第25-26页 |
| 2.2.7 协同活性研究 | 第26-27页 |
| 2.2.8 AnLPM015g的生物信息学分析 | 第27页 |
| 2.2.9 结构域对协同性的影响 | 第27-28页 |
| 2.2.10 N-糖基化对AnLPM015g协同性的影响 | 第28-30页 |
| 2.3 分析方法 | 第30-34页 |
| 2.3.1 还原糖测定 | 第30-31页 |
| 2.3.2 蛋白的SDS-PAGE分析 | 第31页 |
| 2.3.3 蛋白质含量测定 | 第31-32页 |
| 2.3.4 协同度分析 | 第32-33页 |
| 2.3.5 MALDI-TOF/TOF分析 | 第33-34页 |
| 3 结果与讨论 | 第34-65页 |
| 3.1 黑曲霉AA9的克隆表达 | 第34-38页 |
| 3.1.1 黑曲霉总RNA的提取 | 第34页 |
| 3.1.2 目的基因的克隆 | 第34-35页 |
| 3.1.3 重组载体的构建与验证 | 第35-36页 |
| 3.1.4 毕赤酵母的转化与验证 | 第36-37页 |
| 3.1.5 目的基因的诱导表达及表达产物分析纯化 | 第37-38页 |
| 3.1.6 小结 | 第38页 |
| 3.2 酶解与协同活性研究 | 第38-53页 |
| 3.2.1 底物的特异性分析 | 第38页 |
| 3.2.2 产物分析 | 第38-40页 |
| 3.2.3 AnLPM014g和AnLPM015g与纤维素酶的协同性研究 | 第40-43页 |
| 3.2.4 AnLPM014g和AnLPM015g与木聚糖酶的协同性研究 | 第43-46页 |
| 3.2.5 协同活性影响因素研究 | 第46-52页 |
| 3.2.6 小结 | 第52-53页 |
| 3.3 结构域对AnLPM015g协同性的影响 | 第53-58页 |
| 3.3.1 AnLPM015g一级和二级结构预测 | 第53-54页 |
| 3.3.2 CBM域缺失的AnLPM015g基因的获取 | 第54页 |
| 3.3.3 重组质粒的构建与验证 | 第54页 |
| 3.3.4 重组毕赤酵母的验证 | 第54-55页 |
| 3.3.5 重组毕赤酵母的诱导表达 | 第55-56页 |
| 3.3.6 结构域对AnLPM015g与纤维素酶协同性的影响 | 第56-58页 |
| 3.3.7 小结 | 第58页 |
| 3.4 N-糖基化位点突变对AnLPM015g协同性的影响 | 第58-65页 |
| 3.4.1 糖基化位点预测 | 第58页 |
| 3.4.2 去糖基化 | 第58-59页 |
| 3.4.3 N-糖基化位点突变的An15g04900基因的获取 | 第59-60页 |
| 3.4.4 重组质粒的构建 | 第60-61页 |
| 3.4.5 毕赤酵母的转化与验证 | 第61页 |
| 3.4.6 重组毕赤酵母的诱导表达 | 第61-62页 |
| 3.4.7 N-糖基化位点对AnLPM015g与纤维素酶协同性的影响 | 第62-64页 |
| 3.4.8 小结 | 第64-65页 |
| 4 结论 | 第65-66页 |
| 4.1 全文总结 | 第65页 |
| 4.2 论文的创新点 | 第65页 |
| 4.3 论文的不足之处 | 第65-66页 |
| 5 展望 | 第66-67页 |
| 6 参考文献 | 第67-76页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文 | 第76-77页 |
| 8 致谢 | 第77页 |
