| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-17页 |
| 1.1 4-α-糖基转移酶的概述 | 第9-12页 |
| 1.1.1 4-α-糖基转移酶的来源及分类 | 第9页 |
| 1.1.2 4-α-糖基转移酶的催化机制 | 第9-11页 |
| 1.1.3 4-α-糖基转移酶的制备 | 第11页 |
| 1.1.4 4-α-糖基转移酶的应用 | 第11-12页 |
| 1.2 大元环糊精（CA）的概述 | 第12-15页 |
| 1.2.1 CA的理化性质 | 第12-13页 |
| 1.2.2 CA的主要应用 | 第13-14页 |
| 1.2.3 CA的制备方法 | 第14-15页 |
| 1.2.4 CA的检测方法 | 第15页 |
| 1.3 课题的立题依据及意义 | 第15页 |
| 1.4 主要研究内容 | 第15-17页 |
| 第二章 材料和方法 | 第17-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-19页 |
| 2.1.1 菌株及药品 | 第17-18页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第18页 |
| 2.1.3 主要培养基 | 第18-19页 |
| 2.2 重组质粒的构建 | 第19-23页 |
| 2.2.1 目的基因的获取 | 第19-20页 |
| 2.2.2 克隆载体的构建 | 第20-22页 |
| 2.2.3 表达载体的构建 | 第22页 |
| 2.2.4 突变体的构建 | 第22-23页 |
| 2.3 4-α-糖基转移酶的诱导表达 | 第23-24页 |
| 2.3.1 重组菌的构建 | 第23页 |
| 2.3.2 重组菌的摇瓶发酵 | 第23页 |
| 2.3.3 重组菌 3 L罐高密度发酵 | 第23-24页 |
| 2.4 分析方法 | 第24-27页 |
| 2.4.1 大肠杆菌细胞光密度测定 | 第24页 |
| 2.4.2 SDS-PAGE蛋白电泳分析 | 第24页 |
| 2.4.3 蛋白浓度的测定 | 第24页 |
| 2.4.4 4-α-糖基转移酶环化活性的测定 | 第24页 |
| 2.4.5 重组 4-α-糖基转移酶纯化及酶学性质分析 | 第24-25页 |
| 2.4.6 CA的酶转化工艺 | 第25页 |
| 2.4.7 HPSEC体积排阻色谱法定量分析CA | 第25-27页 |
| 第三章 结果和讨论 | 第27-53页 |
| 3.1 不同来源 4-α-糖基转移酶的重组表达及制备CA条件优化 | 第27-36页 |
| 3.1.1 Thermus aquaticus ATCC 33923来源的 4-α-糖基转移酶AaAM重组表达 | 第27-29页 |
| 3.1.2 Aquifex aeolicus来源的 4-α-糖基转移酶Ta AM重组表达 | 第29-31页 |
| 3.1.3 不同来源 4-α-糖基转移酶制备CA的工艺条件优化 | 第31-36页 |
| 3.2 Thermus aquaticus ATCC 33923来源的 4-α-糖基转移酶突变体的重组表达及其应用 | 第36-47页 |
| 3.2.1 突变位点的选择 | 第36页 |
| 3.2.2 TaAM定点突变和突变体摇瓶发酵 | 第36-37页 |
| 3.2.3 天然酶TaAM与突变酶TaAM-Y54G的酶学性质比较 | 第37-40页 |
| 3.2.4 天然酶TaAM与突变酶TaAM-Y54G制备CA比较 | 第40-41页 |
| 3.2.5 突变酶TaAM-Y54G制备CA工艺条件优化 | 第41-46页 |
| 3.2.6 突变酶TaAM-Y54G制备CA产物纯化及质谱鉴定 | 第46-47页 |
| 3.3 重组菌 3 L罐发酵条件优化 | 第47-53页 |
| 3.3.1 诱导温度对菌体生长及产酶的影响 | 第48-49页 |
| 3.3.2 诱导剂浓度对菌体生长及产酶的影响 | 第49-50页 |
| 3.3.3 诱导时间对菌体生长及产酶的影响 | 第50-53页 |
| 主要结论与展望 | 第53-55页 |
| 主要结论 | 第53页 |
| 展望 | 第53-55页 |
| 致谢 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第61页 |
