| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-19页 |
| 1.1 Endo S概述 | 第7-14页 |
| 1.1.1 Endo S来源及其影响 | 第8-9页 |
| 1.1.2 Endo S蛋白结构和催化机理 | 第9-10页 |
| 1.1.3 Endo S的应用 | 第10-13页 |
| 1.1.4 Endo S大肠杆菌外源表达研究进展 | 第13-14页 |
| 1.2 唾液酸糖肽概述 | 第14-15页 |
| 1.2.1 唾液酸糖肽的结构及应用 | 第14页 |
| 1.2.2 唾液酸糖肽的来源及提取 | 第14-15页 |
| 1.3 固定化酶概述 | 第15-17页 |
| 1.3.1 固定化酶简介及其应用 | 第15-16页 |
| 1.3.2 酶固定化方法 | 第16-17页 |
| 1.3.3 微反应器流式化学在固定化酶中的应用 | 第17页 |
| 1.4 课题研究意义及主要内容 | 第17-19页 |
| 1.4.1 论文立题背景和研究意义 | 第17页 |
| 1.4.2 论文主要研究内容 | 第17-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 实验菌株及质粒 | 第19页 |
| 2.1.2 主要试剂及材料 | 第19页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.4 主要培养基及试剂配制 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-28页 |
| 2.2.1 Endo S天然底物唾液酸糖肽SGP的提取 | 第21-22页 |
| 2.2.2 糖苷内切酶的构建表达 | 第22-24页 |
| 2.2.3 糖苷内切酶Endo S初步表达纯化 | 第24页 |
| 2.2.4 蛋白定量及电泳 | 第24页 |
| 2.2.5 糖苷内切酶Endo S发酵表达优化 | 第24-25页 |
| 2.2.6 Endo S催化SGP水解表征 | 第25-26页 |
| 2.2.7 Endo S固定化 | 第26页 |
| 2.2.8 固定化Endo S分批反应催化SGP水解性能评价 | 第26页 |
| 2.2.9 固定化Endo S水解利妥昔单抗 | 第26页 |
| 2.2.10 固定化Endo S流式反应器的设计组装 | 第26-28页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第28-46页 |
| 3.1 Endo S底物唾液酸糖肽(SGP)的提取 | 第28-32页 |
| 3.1.1 蛋黄粉脱脂及粗提取 | 第28-31页 |
| 3.1.2 粗品SGP的G25葡聚糖凝胶精制 | 第31-32页 |
| 3.2 Endo S外源表达大肠杆菌的构建及初步表达 | 第32-36页 |
| 3.2.1 菌株构建 | 第32-33页 |
| 3.2.2 Endo S初步诱导表达 | 第33-34页 |
| 3.2.3 Endo S酶活验证 | 第34-36页 |
| 3.3 重组菌BL21(DE3)/pET28a-Endo S摇瓶水平发酵优化 | 第36-40页 |
| 3.3.1 基础培养基筛选 | 第36页 |
| 3.3.2 氮源种类优化 | 第36-37页 |
| 3.3.3 碳源种类优化 | 第37页 |
| 3.3.4 无机盐的影响 | 第37-38页 |
| 3.3.5 其他组分的影响 | 第38页 |
| 3.3.6 发酵温度和发酵周期的影响 | 第38-39页 |
| 3.3.7 发酵初始pH的影响 | 第39页 |
| 3.3.8 摇瓶验证发酵优化结果 | 第39-40页 |
| 3.4 Endo S固定化初步研究 | 第40-46页 |
| 3.4.1 分批反应固定化Endo S性质研究 | 第41-44页 |
| 3.4.2 流式反应器在固定化Endo S水解SGP反应中的初步应用 | 第44-46页 |
| 主要结论与展望 | 第46-47页 |
| 主要结论 | 第46页 |
| 展望 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-51页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第51页 |
