| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-15页 |
| ·β-葡萄糖苷酶简介 | 第8-10页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的性质 | 第8页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的分类和来源 | 第8-9页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的应用 | 第9-10页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的研究现状 | 第10页 |
| ·P. pastoris 表达系统 | 第10-13页 |
| ·P. pastoris 表达系统简介 | 第10-11页 |
| ·P. pastoris 发酵优化策略 | 第11-12页 |
| ·P. pastoris 伴侣蛋白的共表达策略 | 第12-13页 |
| ·立题依据及意义 | 第13页 |
| ·本论文主要研究内容 | 第13-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-24页 |
| ·菌种和质粒 | 第15页 |
| ·试剂 | 第15页 |
| ·主要仪器 | 第15页 |
| ·细胞培养 | 第15-17页 |
| ·培养基 | 第15-16页 |
| ·培养方法 | 第16-17页 |
| ·分子生物学操作 | 第17-21页 |
| ·P. pastoris 基因组的提取 | 第17-18页 |
| ·PCR 扩增二硫键异构酶PDI 基因 | 第18页 |
| ·PCR 产物回收 | 第18页 |
| ·重组表达载体pPICZαA-pdi 构建 | 第18-19页 |
| ·化转Escherichia coli 感受态细胞 | 第19页 |
| ·重组质粒pPICZαA-pdi 的筛选与鉴定 | 第19页 |
| ·重组P. pastoris 的构建与筛选 | 第19-21页 |
| ·重组酵母的培养和诱导表达 | 第21页 |
| ·分析方法 | 第21-24页 |
| ·酵母细胞浓度测定 | 第21页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第21页 |
| ·pNPG 水解酶活力测定方法 | 第21页 |
| ·培养基中甲醇、乙醇、乙酸、甘油、山梨醇浓度的测定 | 第21-22页 |
| ·细胞内活性氧的测定 | 第22页 |
| ·酵母细胞活性测定 | 第22页 |
| ·乙醇氧化酶AOX 酶活测定 | 第22-24页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第24-47页 |
| ·重组P. pastoris KM71/pPIC9K-BGL 的3L 罐发酵生产β-葡萄糖苷酶的研究 | 第24-34页 |
| ·初始诱导细胞浓度对β-葡萄糖苷酶产量的影响 | 第24-26页 |
| ·甲醇浓度对β-葡萄糖苷酶产量的影响 | 第26-30页 |
| ·诱导过程中溶氧的控制对β-葡萄糖苷酶产量的影响 | 第30-34页 |
| ·P. pastoris 二硫键异构酶pdi 基因的克隆及共表达 | 第34-37页 |
| ·P. pastoris 基因组的提取 | 第34页 |
| ·PDI 基因的PCR 扩增和重组表达载体的构建 | 第34-35页 |
| ·重组P. pastoris 的构建和筛选 | 第35-36页 |
| ·重组PDI 的表达验证 | 第36-37页 |
| ·重组P. pastoris KM71/pPIC9K-BGL/pPICZαA-PDI 的3L 罐发酵研究 | 第37-47页 |
| ·重组P. pastoris KM71/pPIC9K-BGL/pPICZαA-PDI 的3L 罐放大培养 | 第37-40页 |
| ·酵母培养的双碳源添加研究 | 第40-44页 |
| ·酵母培养的降温诱导策略 | 第44-47页 |
| 第四章 结论及展望 | 第47-49页 |
| ·结论 | 第47-48页 |
| ·展望 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第58页 |
