| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 中英文缩略词表 | 第9-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-28页 |
| 1.1 海藻糖 | 第14页 |
| 1.2 海藻糖的应用 | 第14-15页 |
| 1.2.1 食品方面的应用 | 第14-15页 |
| 1.2.2 医药工业方面的应用 | 第15页 |
| 1.2.3 农业方面的应用 | 第15页 |
| 1.3 海藻糖研究存在的问题 | 第15-17页 |
| 1.3.1 海藻糖的生产方式 | 第15-16页 |
| 1.3.2 产物的分离纯化问题 | 第16-17页 |
| 1.4 海藻糖合酶 | 第17-20页 |
| 1.4.1 海藻糖合酶催化机理 | 第18页 |
| 1.4.2 粗酶纯化 | 第18-19页 |
| 1.4.3 酶固定化 | 第19-20页 |
| 1.5 酵母表面展示技术的研究进展 | 第20-26页 |
| 1.5.1 酵母细胞表面结构及其展示技术的原理 | 第21-22页 |
| 1.5.2 酵母展示系统的构建 | 第22-24页 |
| 1.5.2.1 锚定蛋白的选择 | 第22-23页 |
| 1.5.2.2 载体的构建 | 第23-24页 |
| 1.5.3 酵母表面展示技术研究现状 | 第24-26页 |
| 1.6 课题的研究目的及意义 | 第26-27页 |
| 1.7 课题研究内容 | 第27-28页 |
| 第二章 重组大肠杆菌TSG2013发酵培养基的优化 | 第28-43页 |
| 2.1 材料与方法 | 第28-30页 |
| 2.1.1 菌种 | 第28页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第28-29页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第29页 |
| 2.1.4 培养基 | 第29页 |
| 2.1.5 培养方法 | 第29页 |
| 2.1.6 试验方法 | 第29-30页 |
| 2.2 发酵培养基优化 | 第30-32页 |
| 2.2.1 葡萄糖浓度的筛选 | 第30页 |
| 2.2.2 蛋白胨浓度的筛选 | 第30-31页 |
| 2.2.3 酵母膏浓度的筛选 | 第31页 |
| 2.2.4 硫酸铵浓度的筛选 | 第31页 |
| 2.2.5 镁离子浓度的筛选 | 第31-32页 |
| 2.2.6 摇瓶发酵培养基的优化 | 第32页 |
| 2.3 实验结果和讨论 | 第32-36页 |
| 2.3.1 葡萄糖对重组大肠杆菌TSG2013的影响 | 第32-33页 |
| 2.3.2 氮源对重组大肠杆菌TSG2013的影响 | 第33-35页 |
| 2.3.3 镁离子对重组大肠杆菌TSG2013的影响 | 第35-36页 |
| 2.4 响应面结果分析 | 第36-41页 |
| 2.5 结论 | 第41-43页 |
| 第三章 毕赤酵母展示海藻糖合成酶及其性质研究 | 第43-55页 |
| 3.1 材料和方法 | 第43-48页 |
| 3.1.1 GCW14-TS组合DNA | 第43-45页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第45页 |
| 3.1.3 其它材料和试剂 | 第45-46页 |
| 3.1.4 方法 | 第46-48页 |
| 3.1.4.1 pPIC9K-GCW14-TS载体的构建 | 第46页 |
| 3.1.4.2 pPIC9K-GCW14-TS转化到毕赤酵母GS115中 | 第46页 |
| 3.1.4.3 全细胞催化剂粗酶液制备 | 第46-47页 |
| 3.1.4.4 全细胞催化剂活力测定 | 第47页 |
| 3.1.4.5 全细胞催化剂的性质研究 | 第47-48页 |
| 3.2 结果和分析 | 第48-54页 |
| 3.2.1 pPIC9K-GCW14-TS载体构建 | 第48-49页 |
| 3.2.2 pPIC9k-GCW14-TS载体转化GS115的结果 | 第49-50页 |
| 3.2.3 发酵时间对全细胞催化剂活性的影响 | 第50-51页 |
| 3.2.4 温度对全细胞催化剂活性的影响 | 第51页 |
| 3.2.5 pH对全细胞催化剂活性的影响 | 第51-52页 |
| 3.2.6 金属离子对全细胞催化剂活性的影响 | 第52-53页 |
| 3.2.7 全细胞催化剂的固定化效果 | 第53-54页 |
| 3.3 结论 | 第54-55页 |
| 第四章 重组酵母菌(GCW14-TS-GS115)摇瓶水平BMGY培养基及发酵条件优化 | 第55-64页 |
| 4.1 材料与设备 | 第55-56页 |
| 4.1.1 主要仪器与设备 | 第55-56页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第56页 |
| 4.1.3 实验菌种与培养基 | 第56页 |
| 4.1.3.1 实验菌种 | 第56页 |
| 4.1.3.2 培养基 | 第56页 |
| 4.2 实验方法 | 第56-59页 |
| 4.2.1 菌种活化与保存 | 第56-57页 |
| 4.2.2 全细胞催化剂酶活力测定 | 第57页 |
| 4.2.3 重组酵母菌在不同培养基中的生长 | 第57页 |
| 4.2.4 重组酵母菌摇瓶水平BMGY培养基优化 | 第57页 |
| 4.2.4.1 BMGY培养基甘油添加量的筛选 | 第57页 |
| 4.2.4.2 BMGY培养基甲醇添加量的筛选 | 第57页 |
| 4.2.5 重组酵母菌发酵条件优化 | 第57-58页 |
| 4.2.5.1 重组酵母菌发酵接种量的筛选 | 第57-58页 |
| 4.2.5.2 重组酵母菌发酵装液量的筛选 | 第58页 |
| 4.2.5.3 重组酵母菌发酵起始pH的筛选 | 第58页 |
| 4.2.6 全细胞催化剂酶反应产物透析提纯 | 第58-59页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第59-63页 |
| 4.3.1 不同培养基中重组酵母菌生长情况 | 第59页 |
| 4.3.2 甘油添加量对重组酵母菌生长的影响 | 第59-60页 |
| 4.3.3 甲醇添加量对重组酵母菌产酶的影响 | 第60-61页 |
| 4.3.4 接种量对重组酵母菌产酶的影响 | 第61页 |
| 4.3.5 装液量对重组酵母菌产酶的影响 | 第61-62页 |
| 4.3.6 起始pH值对重组酵母菌产酶的影响 | 第62页 |
| 4.3.7 培养基及发酵条件优化后重组酵母菌的活力验证 | 第62-63页 |
| 4.3.8 全细胞催化剂酶反应产物检测分析 | 第63页 |
| 4.4 结论 | 第63-64页 |
| 第五章 结论与创新 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 附录A (攻读学位期间发表论文和专利目录) | 第75页 |
