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海藻糖合成酶基因工程菌研究

摘要第5-7页
ABSTRACT第7-8页
中英文缩略词表第9-14页
第一章 绪论第14-28页
    1.1 海藻糖第14页
    1.2 海藻糖的应用第14-15页
        1.2.1 食品方面的应用第14-15页
        1.2.2 医药工业方面的应用第15页
        1.2.3 农业方面的应用第15页
    1.3 海藻糖研究存在的问题第15-17页
        1.3.1 海藻糖的生产方式第15-16页
        1.3.2 产物的分离纯化问题第16-17页
    1.4 海藻糖合酶第17-20页
        1.4.1 海藻糖合酶催化机理第18页
        1.4.2 粗酶纯化第18-19页
        1.4.3 酶固定化第19-20页
    1.5 酵母表面展示技术的研究进展第20-26页
        1.5.1 酵母细胞表面结构及其展示技术的原理第21-22页
        1.5.2 酵母展示系统的构建第22-24页
            1.5.2.1 锚定蛋白的选择第22-23页
            1.5.2.2 载体的构建第23-24页
        1.5.3 酵母表面展示技术研究现状第24-26页
    1.6 课题的研究目的及意义第26-27页
    1.7 课题研究内容第27-28页
第二章 重组大肠杆菌TSG2013发酵培养基的优化第28-43页
    2.1 材料与方法第28-30页
        2.1.1 菌种第28页
        2.1.2 主要仪器第28-29页
        2.1.3 主要试剂第29页
        2.1.4 培养基第29页
        2.1.5 培养方法第29页
        2.1.6 试验方法第29-30页
    2.2 发酵培养基优化第30-32页
        2.2.1 葡萄糖浓度的筛选第30页
        2.2.2 蛋白胨浓度的筛选第30-31页
        2.2.3 酵母膏浓度的筛选第31页
        2.2.4 硫酸铵浓度的筛选第31页
        2.2.5 镁离子浓度的筛选第31-32页
        2.2.6 摇瓶发酵培养基的优化第32页
    2.3 实验结果和讨论第32-36页
        2.3.1 葡萄糖对重组大肠杆菌TSG2013的影响第32-33页
        2.3.2 氮源对重组大肠杆菌TSG2013的影响第33-35页
        2.3.3 镁离子对重组大肠杆菌TSG2013的影响第35-36页
    2.4 响应面结果分析第36-41页
    2.5 结论第41-43页
第三章 毕赤酵母展示海藻糖合成酶及其性质研究第43-55页
    3.1 材料和方法第43-48页
        3.1.1 GCW14-TS组合DNA第43-45页
        3.1.2 主要仪器设备第45页
        3.1.3 其它材料和试剂第45-46页
        3.1.4 方法第46-48页
            3.1.4.1 pPIC9K-GCW14-TS载体的构建第46页
            3.1.4.2 pPIC9K-GCW14-TS转化到毕赤酵母GS115中第46页
            3.1.4.3 全细胞催化剂粗酶液制备第46-47页
            3.1.4.4 全细胞催化剂活力测定第47页
            3.1.4.5 全细胞催化剂的性质研究第47-48页
    3.2 结果和分析第48-54页
        3.2.1 pPIC9K-GCW14-TS载体构建第48-49页
        3.2.2 pPIC9k-GCW14-TS载体转化GS115的结果第49-50页
        3.2.3 发酵时间对全细胞催化剂活性的影响第50-51页
        3.2.4 温度对全细胞催化剂活性的影响第51页
        3.2.5 pH对全细胞催化剂活性的影响第51-52页
        3.2.6 金属离子对全细胞催化剂活性的影响第52-53页
        3.2.7 全细胞催化剂的固定化效果第53-54页
    3.3 结论第54-55页
第四章 重组酵母菌(GCW14-TS-GS115)摇瓶水平BMGY培养基及发酵条件优化第55-64页
    4.1 材料与设备第55-56页
        4.1.1 主要仪器与设备第55-56页
        4.1.2 主要试剂第56页
        4.1.3 实验菌种与培养基第56页
            4.1.3.1 实验菌种第56页
            4.1.3.2 培养基第56页
    4.2 实验方法第56-59页
        4.2.1 菌种活化与保存第56-57页
        4.2.2 全细胞催化剂酶活力测定第57页
        4.2.3 重组酵母菌在不同培养基中的生长第57页
        4.2.4 重组酵母菌摇瓶水平BMGY培养基优化第57页
            4.2.4.1 BMGY培养基甘油添加量的筛选第57页
            4.2.4.2 BMGY培养基甲醇添加量的筛选第57页
        4.2.5 重组酵母菌发酵条件优化第57-58页
            4.2.5.1 重组酵母菌发酵接种量的筛选第57-58页
            4.2.5.2 重组酵母菌发酵装液量的筛选第58页
            4.2.5.3 重组酵母菌发酵起始pH的筛选第58页
        4.2.6 全细胞催化剂酶反应产物透析提纯第58-59页
    4.3 实验结果与讨论第59-63页
        4.3.1 不同培养基中重组酵母菌生长情况第59页
        4.3.2 甘油添加量对重组酵母菌生长的影响第59-60页
        4.3.3 甲醇添加量对重组酵母菌产酶的影响第60-61页
        4.3.4 接种量对重组酵母菌产酶的影响第61页
        4.3.5 装液量对重组酵母菌产酶的影响第61-62页
        4.3.6 起始pH值对重组酵母菌产酶的影响第62页
        4.3.7 培养基及发酵条件优化后重组酵母菌的活力验证第62-63页
        4.3.8 全细胞催化剂酶反应产物检测分析第63页
    4.4 结论第63-64页
第五章 结论与创新第64-66页
参考文献第66-74页
致谢第74-75页
附录A (攻读学位期间发表论文和专利目录)第75页

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