| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 引言 | 第7-15页 |
| 1.1 维生素K_2简介 | 第7页 |
| 1.2 维生素K_2的生理功能 | 第7-10页 |
| 1.2.1 维生素K_2和血液凝固 | 第7-8页 |
| 1.2.2 维生素K_2和骨骼健康 | 第8-9页 |
| 1.2.3 维生素K_2的其他生理功能 | 第9-10页 |
| 1.2.4 维生素K_2的市场应用 | 第10页 |
| 1.3 维生素K-2的合成与代谢 | 第10-12页 |
| 1.3.1 微生物体内维生素K_2的合成途径 | 第10-11页 |
| 1.3.2 维生素K循环与菌体呼吸 | 第11-12页 |
| 1.4 纤溶酶产生菌合成维生素K2的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.4.1 维生素K_2高产菌的选育 | 第12-13页 |
| 1.4.2 纤溶酶产生菌的菌种特性归纳 | 第13页 |
| 1.5 本课题研究内容和意义 | 第13-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-19页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-16页 |
| 2.1.1 实验菌株与质粒 | 第15页 |
| 2.1.2 主要实验试剂 | 第15页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第15页 |
| 2.1.4 培养基 | 第15-16页 |
| 2.2 实验方法 | 第16-19页 |
| 2.2.1 培养方法 | 第16页 |
| 2.2.2 维生素K_2(MK-7)的提取与检测方法 | 第16-17页 |
| 2.2.3 玉米粉液化液的制备方法 | 第17页 |
| 2.2.4 还原糖和总糖测定方法 | 第17页 |
| 2.2.5 大肠杆菌感受态细胞的制备与转化方法 | 第17-18页 |
| 2.2.6 枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌感受态细胞的制备与转化方法 | 第18-19页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第19-41页 |
| 3.1 维生素K_2高产菌的筛选 | 第19-21页 |
| 3.1.1 样品中MK-7的提取与检测方法的建立 | 第19-20页 |
| 3.1.2 MK-7标准曲线及检测限 | 第20页 |
| 3.1.3 纤溶酶高产菌合成MK-7能力的比较 | 第20-21页 |
| 3.1.4 样品中MK-7的LC-MS验证 | 第21页 |
| 3.2 菌株鉴定 | 第21-23页 |
| 3.2.1 形态学鉴定 | 第21-22页 |
| 3.2.2 生理生化鉴定 | 第22页 |
| 3.2.3 16S rRNA鉴定 | 第22-23页 |
| 3.2.4 系统发育树的构建 | 第23页 |
| 3.3 发酵条件优化 | 第23-34页 |
| 3.3.1 培养条件选择 | 第23-24页 |
| 3.3.2 碳源的优化 | 第24-25页 |
| 3.3.3 氮源的优化 | 第25-27页 |
| 3.3.4 无机盐的优化 | 第27-28页 |
| 3.3.5 温度和装液量的优化 | 第28页 |
| 3.3.6 接种量和接种后摇培时间的优化 | 第28-29页 |
| 3.3.7 中心复合设计和响应面分析 | 第29-32页 |
| 3.3.8 发酵过程监测 | 第32-33页 |
| 3.3.9 MK-7的分布 | 第33页 |
| 3.3.10 小结 | 第33-34页 |
| 3.4 维生素K_2合成途径中主要酶基因对MK-7产量的影响 | 第34-41页 |
| 3.4.1 维生素K_2合成途径中主要酶基因的扩增和测序 | 第34-35页 |
| 3.4.2 重组质粒的构建 | 第35-36页 |
| 3.4.3 重组质粒在枯草芽孢杆菌168中的表达 | 第36-37页 |
| 3.4.4 解淀粉芽孢杆菌Y-2的感受态细胞制备与转化 | 第37-39页 |
| 3.4.5 不同酶基因对MK-7产量的影响 | 第39-40页 |
| 3.4.6 小结 | 第40-41页 |
| 主要结论与展望 | 第41-43页 |
| 致谢 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-47页 |
| 附录A：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第47-48页 |
| 附录B：解淀粉芽孢杆菌Y-2的16S rRNA序列 | 第48-49页 |
| 附录C：菌株Y-2维生素K_2合成途径中主要酶基因序列 | 第49-54页 |
| 附录D：重组质粒构建过程 | 第54页 |
