| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 目录 | 第5-7页 |
| 第一章 引言 | 第7-15页 |
| 1.1 甲硫氨酸概述 | 第7-9页 |
| 1.1.1 甲硫氨酸的性质 | 第7页 |
| 1.1.2 甲硫氨酸的应用 | 第7-9页 |
| 1.2 甲硫氨酸生产方法 | 第9-13页 |
| 1.2.0 甲硫氨酸生产现状 | 第9页 |
| 1.2.1 工业上甲硫氨酸主要生产方法 | 第9-10页 |
| 1.2.2 甲硫氨酸的微生物制法 | 第10-11页 |
| 1.2.3 谷氨酸棒杆菌简介 | 第11页 |
| 1.2.4 谷氨酸棒杆菌中甲硫氨酸的合成代谢 | 第11-13页 |
| 1.3 立题背景和意义 | 第13页 |
| 1.4 课题方案与研究内容 | 第13-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-25页 |
| 2.1 实验材料与仪器设备 | 第15-18页 |
| 2.1.1 菌株、质粒、引物及培养条件 | 第15-17页 |
| 2.1.2 相关培养基及用途 | 第17页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第18页 |
| 2.2 分子生物学相关操作 | 第18-20页 |
| 2.2.1 基因组 DNA 提取及质粒提取 | 第18-19页 |
| 2.2.2 PCR 反应 | 第19页 |
| 2.2.3 质粒和 DNA 片段的酶切连接 | 第19页 |
| 2.2.4 大肠杆菌感受态细胞的制备及化学转化 | 第19-20页 |
| 2.2.5 谷氨酸棒杆菌感受态的制备及电转化 | 第20页 |
| 2.3 甲硫氨酸合成相关表达质粒与敲除质粒的构建 | 第20-22页 |
| 2.3.1 甲硫氨酸合成基因 hom，lysC 的定点突变 | 第20-21页 |
| 2.3.2 表达质粒 pJYW-4-homm-lysCm, pJYW-4-homm-lysCm-brnFE 的构建. | 第21页 |
| 2.3.3 敲除质粒 pWTQ1 和 pWTQ2 的构建 | 第21-22页 |
| 2.4 谷氨酸棒杆菌甲硫氨酸突变株的构建及发酵分析 | 第22-25页 |
| 2.4.1 谷氨酸棒杆菌中相关突变株的构建 | 第22-23页 |
| 2.4.2 发酵分析 | 第23页 |
| 2.4.3 氨基酸、残糖和细胞干重的测定 | 第23-24页 |
| 2.4.4 胞内氨基酸的检测 | 第24页 |
| 2.4.5 RT-PCR 分析 | 第24-25页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第25-37页 |
| 3.1 谷氨酸棒杆菌中构建的突变株摇瓶发酵分析 | 第25-33页 |
| 3.1.1 定点突变获得反馈抗性基因 homm和 lysCm | 第25-26页 |
| 3.1.2 相关表达与敲除质粒的构建 | 第26-27页 |
| 3.1.3 通过敲除 thrB 基因积累甲硫氨酸前体物质 | 第27-28页 |
| 3.1.4 过量表达反馈抗性基因 hom_m和 lysC_m进一步提高前体高丝氨酸积累 | 第28-29页 |
| 3.1.5 敲除基因 mcbR 可加强甲硫氨酸下游合成途径促进甲硫氨酸合成 | 第29-31页 |
| 3.1.6 双敲基础上进一步表达反馈抗性基因 homm和 lysCm促进甲硫氨酸积累 | 第31-32页 |
| 3.1.7 通过表达转运蛋白编码基因 brnFE 可进一步提高胞外甲硫氨酸产量 | 第32-33页 |
| 3.2 突变株 C. glutamicum WTQ102/pJYW-4-homm-lysCm-brnFE 的发酵水平优化 | 第33-35页 |
| 3.2.1 L-半胱氨酸添加浓度对甲硫氨酸产量的提高 | 第33-34页 |
| 3.2.2 发酵液 pH 对甲硫氨酸产量的影响 | 第34页 |
| 3.2.3 L-异亮氨酸添加浓度对甲硫氨酸产量的影响 | 第34-35页 |
| 3.3 突变株 C. glutamicum WTQ102/pJYW-4-homm-lysCm-brnFE 的罐上发酵 | 第35-37页 |
| 主要结论与展望 | 第37-39页 |
| 主要结论 | 第37-38页 |
| 展望 | 第38-39页 |
| 致谢 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-44页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第44页 |
