| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 中英文缩略词 | 第10-15页 |
| 1 综述 | 第15-29页 |
| 1.1 二氧化碳的固定 | 第15-18页 |
| 1.1.1 二氧化碳的处理方案 | 第15页 |
| 1.1.2 二氧化碳生物固定途径 | 第15-16页 |
| 1.1.3 产乙酸梭菌的CO_2固定途径 | 第16-17页 |
| 1.1.4 C.aceticum的二氧化碳固定途径 | 第17-18页 |
| 1.2 AOR酶的研究现状 | 第18-21页 |
| 1.2.1 细菌产乙醇途径与AOR酶的发现 | 第18-19页 |
| 1.2.2 AOR酶的特性 | 第19-20页 |
| 1.2.3 其他菌株中AOR酶结构的研究现状 | 第20-21页 |
| 1.3 C.aceticum的分子生物学研究现状 | 第21-23页 |
| 1.3.1 C.aceticum的全基因组测序结果 | 第21-22页 |
| 1.3.2 C.aceticum的分子生物学操作系统 | 第22-23页 |
| 1.4 pMTL82151穿梭质粒 | 第23-24页 |
| 1.4.1 pMTL80000系列穿梭质粒 | 第23-24页 |
| 1.4.2 pMTL82151穿梭质粒的结构 | 第24页 |
| 1.4.3 E.coli CA434接合转移pMTL82151 | 第24页 |
| 1.5 In-Fusion克隆方案 | 第24-26页 |
| 1.5.1 In-Fusion克隆的原理 | 第24-25页 |
| 1.5.2 In-Fusion克隆的操作步骤 | 第25-26页 |
| 1.6 本文的研究目的、研究意义、研究内容和技术路线 | 第26-29页 |
| 1.6.1 本文的研究目的 | 第26页 |
| 1.6.2 本文的研究意义 | 第26页 |
| 1.6.3 本文的研究内容 | 第26-28页 |
| 1.6.4 技术路线 | 第28-29页 |
| 2 实验材料与方法 | 第29-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第29-31页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第29-30页 |
| 2.1.2 主要试剂盒 | 第30页 |
| 2.1.3 菌株与培养基配方 | 第30页 |
| 2.1.4 抗生素的配制 | 第30-31页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第31页 |
| 2.1.6 主要数据库和程序 | 第31页 |
| 2.1.7 载体 | 第31页 |
| 2.2 梭菌AOR酶基因的查找与分析方法 | 第31-33页 |
| 2.2.1 梭菌AOR酶基因的查找 | 第31-32页 |
| 2.2.2 AOR酶编码基因上下游非编码区的查找与分析 | 第32页 |
| 2.2.3 AOR酶氨基酸序列的比对与同源性分析 | 第32-33页 |
| 2.3 AOR酶的蛋白质结构预测分析方法 | 第33-34页 |
| 2.3.1 梭菌AOR酶蛋白保守结构域的分析 | 第33页 |
| 2.3.2 梭菌AOR酶蛋白二级结构的预测与分析 | 第33页 |
| 2.3.3 梭菌AOR酶蛋白的三级结构预测与分析 | 第33-34页 |
| 2.4 全基因组和代谢途径分析 | 第34-36页 |
| 2.4.1 梭菌AOR酶基因的定位分析 | 第34-35页 |
| 2.4.2 AOR酶编码基因上下游序列分析 | 第35页 |
| 2.4.3 野生型C.aceticum的代谢途径分析 | 第35页 |
| 2.4.4 AOR酶基因过表达菌株的代谢功能预测方法 | 第35-36页 |
| 2.5 AOR酶重组质粒的构建与筛选方法 | 第36-39页 |
| 2.5.1 AOR酶基因的PCR扩增引物的设计 | 第36页 |
| 2.5.2 AOR酶基因的PCR扩增与分离纯化 | 第36-38页 |
| 2.5.3 携带AOR酶基因的重组质粒的构建 | 第38页 |
| 2.5.4 重组质粒筛选和验证 | 第38-39页 |
| 2.6 AOR酶过表达菌株的构建与筛选方法 | 第39-40页 |
| 2.6.1 将重组质粒转化到E.coli CA434 | 第39页 |
| 2.6.2 通过接合法将重组质粒转移到C.aceticum | 第39-40页 |
| 2.6.3 重组型C.aceticum的筛选和鉴定 | 第40页 |
| 2.7 菌株的培养与代谢产物对比分析方法 | 第40-41页 |
| 2.7.1 菌株培养方法 | 第40-41页 |
| 2.7.2 细胞生长测定与代谢产物测定方法 | 第41页 |
| 3 结果与讨论 | 第41-72页 |
| 3.1 AOR酶序列的生物信息学分析 | 第41-44页 |
| 3.1.1 AOR酶编码基因和氨基酸序列的查找 | 第41-42页 |
| 3.1.2 AOR酶氨基酸序列的比对分析 | 第42-44页 |
| 3.1.3 讨论 | 第44页 |
| 3.2 AOR酶的蛋白质结构预测 | 第44-52页 |
| 3.2.1 AOR酶保守结构域的查找 | 第44-45页 |
| 3.2.2 C.aceticumAOR酶蛋白的二级结构预测分析 | 第45-48页 |
| 3.2.3 C.aceticum AOR酶蛋白的三级结构预测 | 第48-51页 |
| 3.2.4 讨论 | 第51-52页 |
| 3.3 C.aceticum的全基因组和代谢分析 | 第52-60页 |
| 3.3.1 梭菌AOR酶基因在基因组中的定位分析 | 第52-54页 |
| 3.3.2 AOR酶编码基因两侧序列的分析结果 | 第54-55页 |
| 3.3.3 野生型C.aceticum代谢功能分析 | 第55-57页 |
| 3.3.4 C.aceticum过表达AOR酶的代谢预测 | 第57-59页 |
| 3.3.5 讨论 | 第59-60页 |
| 3.4 重组质粒的构建 | 第60-65页 |
| 3.4.1 引物分析结果 | 第60-61页 |
| 3.4.2 AOR酶编码基因的PCR扩增结果 | 第61-62页 |
| 3.4.3 重组质粒的构建与验证 | 第62-64页 |
| 3.4.4 讨论 | 第64-65页 |
| 3.5 AOR酶的过表达工程菌的构建 | 第65-67页 |
| 3.5.1 将重组质粒转化到E.coli CA434 | 第65-67页 |
| 3.5.2 讨论 | 第67页 |
| 3.6 野生菌和重组菌的代谢产物分析 | 第67-72页 |
| 3.6.1 野生型C.aceticum的代谢分析 | 第67-70页 |
| 3.6.2 AOR酶过表达工程菌的代谢分析 | 第70-71页 |
| 3.6.3 讨论 | 第71-72页 |
| 4 结论与展望 | 第72-74页 |
| 4.1 结论 | 第72-73页 |
| 4.2 展望 | 第73页 |
| 4.3 创新点 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-84页 |
| 附录A | 第84-86页 |
| 附录B | 第86-88页 |
| 附录C | 第88-90页 |
| 附录D | 第90-91页 |
| 附录E | 第91-98页 |
| 攻读学位期间发表的学术成果 | 第98-99页 |
