| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-34页 |
| ·黄嘌呤氧化酶/脱氢酶概述 | 第12-14页 |
| ·XOD/XDH的来源与分布 | 第14-15页 |
| ·XOD/XDH活性检测方法的研究进展 | 第15-16页 |
| ·XOD/XDH的酶学基本性质 | 第16-18页 |
| ·真核生物XOD/XDH的基本性质 | 第16-17页 |
| ·细菌XOD/XDH的纯化与部分性质 | 第17-18页 |
| ·XOD/XDH的分子结构和催化机理 | 第18-20页 |
| ·真核生物XOD/XDH的结构与催化机理 | 第18-19页 |
| ·细菌XOD/XDH的结构与催化机理 | 第19-20页 |
| ·XOD/XDH基因结构与分子克隆 | 第20-22页 |
| ·XOD/XDH的基因结构和序列分析 | 第20-22页 |
| ·XOD/XDH基因的克隆表达 | 第22页 |
| ·XOD的应用研究 | 第22-23页 |
| ·XOD的生物学功能 | 第22-23页 |
| ·XOD在临床检验上的应用 | 第23页 |
| ·XOD作为杀菌剂和肿瘤抑制剂 | 第23页 |
| ·其他方面的应用 | 第23页 |
| ·本课题的研究目的和意义 | 第23-24页 |
| ·本课题的研究内容和方法 | 第24页 |
| 参考文献 | 第24-34页 |
| 第二章 黄嘌呤氧化酶活力及其底物和产物的检测方法建立 | 第34-44页 |
| ·引言 | 第34页 |
| ·材料与方法 | 第34-35页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-35页 |
| ·样品处理 | 第35页 |
| ·双酶偶联法测定黄嘌呤氧化酶活力 | 第35-39页 |
| ·双酶法测定原理 | 第35-36页 |
| ·测定方法的建立 | 第36-39页 |
| ·测定方法的评价 | 第39页 |
| ·反相高效液相色谱法定量分析黄嘌呤和尿酸 | 第39-42页 |
| ·HPLC流动相体系的选择 | 第39-40页 |
| ·HPLC流动相组分比例的优化 | 第40页 |
| ·流动相pH对分离效果的影响 | 第40页 |
| ·柱温对分离效果的影响 | 第40页 |
| ·最优色谱分离条件 | 第40-41页 |
| ·HPLC稳定性考察 | 第41页 |
| ·诱导物及其产物的标准工作曲线的绘制及检出限 | 第41页 |
| ·发酵液样品测定的回收率试验 | 第41-42页 |
| ·本章小结 | 第42页 |
| 参考文献 | 第42-44页 |
| 第三章 黄嘌呤氧化酶产生菌种的筛选及鉴定 | 第44-54页 |
| ·引言 | 第44页 |
| ·材料和方法 | 第44-46页 |
| ·菌种 | 第44页 |
| ·培养基 | 第44页 |
| ·培养方法 | 第44-45页 |
| ·分析方法 | 第45-46页 |
| ·结果与讨论 | 第46-52页 |
| ·产XOD菌株的分离筛选及生理生化鉴定 | 第46-47页 |
| ·Arthrobacter sp.XL26菌株16S rDNA序列分析 | 第47-49页 |
| ·构建Arthrobacter sp.XL26菌株的系统进化树 | 第49-50页 |
| ·诱导合成XOD和XDH的比例 | 第50-51页 |
| ·Arthrobacter sp.XL26发酵与产酶基本特性 | 第51-52页 |
| ·结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-54页 |
| 第四章 Arthrobacter sp.XL26发酵产XOD的研究 | 第54-70页 |
| ·引言 | 第54页 |
| ·材料与方法 | 第54-55页 |
| ·菌种 | 第54页 |
| ·培养基 | 第54页 |
| ·培养方法 | 第54-55页 |
| ·分析方法 | 第55页 |
| ·结果与讨论 | 第55-68页 |
| ·碳源对发酵产XOD的影响 | 第55-57页 |
| ·氮源对发酵产XOD的影响 | 第57-58页 |
| ·磷酸盐缓冲液对发酵产XOD的影响 | 第58-59页 |
| ·诱导物对发酵产XOD的影响及产酶机理 | 第59-60页 |
| ·物理因素对发酵产XOD的影响 | 第60-61页 |
| ·环境条件对发酵产XOD的影响 | 第61-62页 |
| ·Plackett-Burman设计法确定发酵产XOD的主因子 | 第62-63页 |
| ·响应面分析法综合优化发酵产XOD的主因素 | 第63-66页 |
| ·Arthrobacter sp.XL26产XOD的发酵过程 | 第66-67页 |
| ·发酵产XOD的间歇补料实验 | 第67-68页 |
| ·结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-70页 |
| 第五章 黄嘌呤氧化酶的分离纯化及性质研究 | 第70-94页 |
| ·引言 | 第70-71页 |
| ·材料与方法 | 第71-75页 |
| ·菌种及保藏 | 第71页 |
| ·主要实验生化试剂 | 第71页 |
| ·主要实验仪器 | 第71-72页 |
| ·XOD酶活性测定 | 第72页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第72页 |
| ·硫酸铵含量测定 | 第72页 |
| ·SDS-PAGE和native-PAGE分析 | 第72页 |
| ·菌体培养和细胞收集 | 第72页 |
| ·分光光度法测定细胞破碎率 | 第72页 |
| ·细胞破碎抽提XOD | 第72页 |
| ·酶的分离纯化 | 第72-74页 |
| ·酶学性质 | 第74-75页 |
| ·结果与讨论 | 第75-89页 |
| ·细胞破碎抽提黄嘌呤氧化酶 | 第75-78页 |
| ·黄嘌呤氧化酶粗级分离 | 第78-80页 |
| ·疏水层析 | 第80-82页 |
| ·DEAE Sepharose CL-6BFF阴离子交换层析 | 第82页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第82-83页 |
| ·分离纯化总流程 | 第83-84页 |
| ·黄嘌呤氧化酶的部分酶学性质 | 第84-89页 |
| ·结论 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-94页 |
| 第六章 黄嘌呤氧化酶基因序列与结构预测 | 第94-120页 |
| ·前言 | 第94页 |
| ·材料与方法 | 第94-98页 |
| ·质粒及菌种 | 第94页 |
| ·主要分子试剂 | 第94-95页 |
| ·主要仪器设备 | 第95页 |
| ·细菌培养方法 | 第95页 |
| ·PCR引物的设计合成 | 第95页 |
| ·PCR扩增 | 第95页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳及DNA凝胶回收 | 第95-96页 |
| ·测序用克隆载体与目的基因的连接 | 第96页 |
| ·感受态细胞制备与转化 | 第96页 |
| ·重组子的筛选与鉴定 | 第96页 |
| ·质粒DNA的小量抽提 | 第96-97页 |
| ·生物信息学网络资源和应用软件 | 第97页 |
| ·生物信息学分析方法 | 第97-98页 |
| ·黄嘌呤氧化酶数据库的构建 | 第98-101页 |
| ·黄嘌呤氧化酶蛋白序列和基因序列的收集 | 第98-99页 |
| ·黄嘌呤脱氢酶蛋白序列和基因序列同源比对 | 第99-100页 |
| ·黄嘌呤氧化酶三维结构数据的收集 | 第100-101页 |
| ·Arthrobacter sp.XL26菌株黄嘌呤氧化酶基因的克隆与分析 | 第101-115页 |
| ·黄嘌呤氧化酶基因克隆简并引物的设计 | 第101-102页 |
| ·黄嘌呤氧化酶基因的克隆测序及拼接 | 第102-110页 |
| ·黄嘌呤氧化酶基因及推导的氨基酸序列分析 | 第110-111页 |
| ·黄嘌呤氧化酶基因推导的蛋白二级结构预测分析 | 第111-114页 |
| ·黄嘌呤氧化酶基因推导的蛋白三级结构预测分析 | 第114-115页 |
| ·讨论 | 第115-116页 |
| 参考文献 | 第116-120页 |
| 结论 | 第120-122页 |
| 论文创新点 | 第122-123页 |
| 致谢 | 第123-124页 |
| 附录1 | 第124-130页 |
| 附录2 | 第130-133页 |
| 缩略词表 | 第133-134页 |
| 攻读博士期间发表的研究论文 | 第134页 |
