| 摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 1 绪论 | 第10-27页 |
| 1.1 纤维素乙醇生产概述 | 第10-15页 |
| 1.1.1 世界上纤维素乙醇发展现状 | 第10-11页 |
| 1.1.2 纤维素乙醇生产菌株 | 第11-12页 |
| 1.1.3 纤维素乙醇生产过程及影响因素 | 第12-15页 |
| 1.2 环境胁迫作用对纤维素乙醇生产酵母的影响 | 第15-22页 |
| 1.2.1 影响纤维素乙醇生产的环境胁迫因素 | 第15-16页 |
| 1.2.2 氧化胁迫对酿酒酵母细胞的损伤及细胞耐性机理(ROS) | 第16-19页 |
| 1.2.3 乙酸对酿酒酵母细胞毒性的机理及乙酸耐性分子机理 | 第19-22页 |
| 1.3 提高酿酒酵母环境胁迫耐受性的方法 | 第22-26页 |
| 1.3.1 随机诱变 | 第22-23页 |
| 1.3.2 外源添加物质提高酿酒酵母耐受性 | 第23-24页 |
| 1.3.3 代谢工程改造 | 第24-26页 |
| 1.4 本研究工作目的意义和内容 | 第26-27页 |
| 2 硫酸锌添加对酿酒酵母乙酸胁迫条件下全局转录组的影响 | 第27-39页 |
| 2.1 引言 | 第27页 |
| 2.2 实验材料 | 第27-28页 |
| 2.2.1 实验菌株 | 第27页 |
| 2.2.2 实验培养基和试剂 | 第27页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第27-28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-31页 |
| 2.3.1 种子活化和批次发酵 | 第28页 |
| 2.3.2 乙酸胁迫条件下硫酸锌添加转录组学测定 | 第28-29页 |
| 2.3.3 转录组变化的基因RT-qPCR验证 | 第29-31页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第31-38页 |
| 2.4.1 硫酸锌对自絮凝酵母SPSC01乙酸胁迫耐受性的影响 | 第31-32页 |
| 2.4.2 转录组中表达水平变化基因的RT-qPCR验证及分析 | 第32-33页 |
| 2.4.3 转录组中表达水平变化的基因涉及代谢途径分析 | 第33-34页 |
| 2.4.4 硫酸锌添加与能量代谢途径基因转录水平分析 | 第34-35页 |
| 2.4.5 硫酸锌添加与耐受性相关基因转录水平分析 | 第35-37页 |
| 2.4.6 硫酸锌添加与甲硫氨酸合成相关基因转录水平分析 | 第37-38页 |
| 2.5 本章小结 | 第38-39页 |
| 3 硫酸锌添加对酿酒酵母乙酸胁迫条件下全局蛋白组的影响 | 第39-49页 |
| 3.1 引言 | 第39页 |
| 3.2 实验材料 | 第39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-40页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第40-48页 |
| 3.4.1 蛋白组中表达水平变化的蛋白涉及代谢途径分析 | 第40-41页 |
| 3.4.2 硫酸锌添加与能量代谢途径相关蛋白分析 | 第41-42页 |
| 3.4.3 硫酸锌添加与ATP合成途径相关蛋白分析 | 第42-43页 |
| 3.4.4 硫酸锌添加与麦角固醇合成途径相关蛋白分析 | 第43-44页 |
| 3.4.5 硫酸锌添加与氨基酸合成途径相关蛋白表达水平分析 | 第44-45页 |
| 3.4.6 硫酸锌添加与GTP合成途径相关蛋白表达水平分析 | 第45-46页 |
| 3.4.7 硫酸锌添加条件下转录组和蛋白组共表达基因分析 | 第46-47页 |
| 3.4.8 锌离子提高乙酸耐受性的分子机理 | 第47-48页 |
| 3.5 本章小结 | 第48-49页 |
| 4 利用多重组学挖掘表达差异基因构建耐性菌株 | 第49-62页 |
| 4.1 引言 | 第49页 |
| 4.2 实验材料 | 第49-50页 |
| 4.2.1 实验相关仪器设备 | 第49页 |
| 4.2.2 实验相关培养基及试剂 | 第49-50页 |
| 4.2.3 实验菌种和质粒 | 第50页 |
| 4.3 实验方法 | 第50-56页 |
| 4.3.1 载体的构建 | 第50-53页 |
| 4.3.2 过表达菌株的构建 | 第53-55页 |
| 4.3.3 耐受性分析 | 第55页 |
| 4.3.4 乙酸胁迫条件下发酵性能分析 | 第55-56页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第56-61页 |
| 4.4.1 载体构建验证 | 第56-57页 |
| 4.4.2 耐受性分析 | 第57-60页 |
| 4.4.3 乙酸胁迫条件下发酵性能分析 | 第60-61页 |
| 4.5 本章小结 | 第61-62页 |
| 5 YIL002W-A基因提高酿酒酵母乙酸耐受性机理探讨 | 第62-82页 |
| 5.1 引言 | 第62页 |
| 5.2 实验材料 | 第62-63页 |
| 5.2.1 菌种和质粒 | 第62-63页 |
| 5.2.2 主要试剂盒和仪器 | 第63页 |
| 5.3 实验方法 | 第63-69页 |
| 5.3.1 YIL002W-A过表达和敲除菌株构建 | 第63-64页 |
| 5.3.2 重组菌株生长状态评估和乙酸发酵过程中基因表达情况 | 第64页 |
| 5.3.3 胞内抗氧化酶酶活及ATP、ROS检测 | 第64-65页 |
| 5.3.4 S288c和SPSC01两个基因组中YIL002W-A基因的碱基序列 | 第65页 |
| 5.3.5 Yil2w-ap在细胞内的定位和对乙酸的胁迫响应 | 第65-66页 |
| 5.3.6 转录调控因子分析 | 第66-69页 |
| 5.3.7 敲除YIL002W-A突变体中基因转录水平检测 | 第69页 |
| 5.4 实验结果与讨论 | 第69-81页 |
| 5.4.1 YIL002W-A基因对S288c耐受性分析 | 第69页 |
| 5.4.2 在乙酸胁迫下YIL002W-A基因对S288c生长及发酵性能分析 | 第69-71页 |
| 5.4.3 胞内酶活分析 | 第71-73页 |
| 5.4.4 YIL002W-A基因在S288c和SPSC01菌株中序列分析 | 第73页 |
| 5.4.5 YIL002W-A基因对乙酸的响应 | 第73-74页 |
| 5.4.6 转录调控因子分析 | 第74-76页 |
| 5.4.7 敲除突变体转录组分析 | 第76-81页 |
| 5.5 本章小结 | 第81-82页 |
| 结论 | 第82-83页 |
| 创新点 | 第83-84页 |
| 展望 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-93页 |
| 附录 本论文涉及的酶基因序列 | 第93-97页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第97-98页 |
| 致谢 | 第98-100页 |
