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代谢工程改造耶罗维解脂酵母生产β-胡萝卜素研究

摘要第11-13页
Abstract第13-14页
缩写词表第15-16页
第1章 绪论第16-34页
    1.1 引言第16-17页
    1.2 β-胡萝卜素的应用及市场第17-19页
        1.2.1 β-胡萝卜素简介第17-18页
        1.2.2 β-胡萝卜素的应用第18-19页
        1.2.3 β-胡萝卜素的市场第19页
    1.3 β-胡萝卜素的合成第19-26页
        1.3.1 β-胡萝卜素的化学合成第20页
        1.3.2 从含 β-胡萝卜素的植物中提取 β-胡萝卜素第20页
        1.3.3 微生物培养生产 β-胡萝卜素第20-21页
        1.3.4 β-胡萝卜素的生物合成途径第21-23页
        1.3.5 β-胡萝卜素的异源表达研究第23-26页
    1.4 耶罗维解脂酵母的代谢工程研究第26-31页
        1.4.1 代谢改造耶罗维解脂酵母生产脂质或生物燃料第27-28页
        1.4.2 代谢改造耶罗维解脂酵母生产功能性脂肪酸第28-30页
        1.4.3 代谢改造耶罗维解脂酵母生产类胡萝卜素第30-31页
    1.5 本课题的研究内容和意义第31-34页
第2章 三孢布拉霉 β-胡萝卜素生物合成基因的克隆和表达第34-62页
    2.1 材料与方法第35-47页
        2.1.1 引物、菌株与质粒第35-38页
        2.1.2 主要生化试剂第38页
        2.1.3 主要溶液及培养基配置第38-40页
        2.1.4 主要仪器和设备第40-41页
        2.1.5 菌株的活化、培养与保存第41页
        2.1.6 酵母DNA提取步骤第41-42页
        2.1.7 质粒抽提、酶切、连接等分子生物学操作第42页
        2.1.8 同源重组连接DNA片段第42页
        2.1.9 卷枝毛霉RNA的抽提与 β-胡萝卜素基因的克隆第42-43页
        2.1.10 质粒构建第43-45页
        2.1.11 耶罗维解脂酵母转化方法第45-46页
        2.1.12 β-胡萝卜素的提取与分析第46-47页
    2.2 结果与讨论第47-59页
        2.2.1 β-胡萝卜素基因的克隆第47-50页
        2.2.2 质粒构建第50-52页
        2.2.3 耶罗维解脂酵母遗传操作系统的优化第52-56页
        2.2.4 β-胡萝卜素产生菌株的构建第56-59页
    2.3 本章小结第59-62页
第3章 FPP代谢的调节对 β-胡萝卜素合成的影响第62-82页
    3.1 材料与方法第63-71页
        3.1.1 引物、质粒和菌株第63-65页
        3.1.2 培养基、试剂、仪器及主要溶液第65页
        3.1.3 主要溶液及培养基配置第65-66页
        3.1.4 主要仪器和设备第66页
        3.1.5 质粒抽提、酶切、连接、同源重组等分子生物学操作第66页
        3.1.6 质粒构建第66-68页
        3.1.7 HMG-CoA reductase活力测定第68-69页
        3.1.8 实时定量PCR检测HMG~(cata)的转录第69-70页
        3.1.9 麦角固醇的提取与检测第70-71页
        3.1.10 角鲨烯的提取与检测第71页
    3.2 结果与讨论第71-80页
        3.2.1 HMG-CoA还原酶催化部位的克隆第71-73页
        3.2.2 质粒构建第73-74页
        3.2.3 过表达HMG~(cata)菌株的构建第74-78页
        3.2.4 弱化ERG9基因菌株的构建第78-80页
    3.3 本章小结第80-82页
第4章 GUT2及POX1-6 敲除对 β-胡萝卜素途径的影响第82-94页
    4.1 材料与方法第84-87页
        4.1.1 引物、质粒及菌株第84-85页
        4.1.2 培养基及试剂第85-86页
        4.1.3 主要溶液及培养基配置第86页
        4.1.4 主要仪器和设备第86页
        4.1.5 质粒抽提、酶切、连接、同源重组等分子生物学操作第86页
        4.1.6 质粒构建第86页
        4.1.7 耶罗维解脂酵母转化方法第86-87页
        4.1.8 耶罗维解脂酵母中 β-胡萝卜素的提取与HPLC分析第87页
    4.2 结果与讨论第87-92页
        4.2.1 H306、H405、H512及H611菌株的构建第87-89页
        4.2.2 H306、H405、H511及H611菌株的生长情况的比较第89-90页
        4.2.3 H306、H405、H512及H611菌株的 β-胡萝卜素产量比较第90-91页
        4.2.4 Ku70敲除对同源重组效率的影响第91-92页
    4.3 本章小结第92-94页
第5章 高产 β-胡萝卜素菌株的构建第94-112页
    5.1 材料与方法第94-99页
        5.1.1 引物、质粒与菌株第94-96页
        5.1.2 培养基、试剂、仪器及主要溶液第96页
        5.1.3 主要溶液及培养基配置第96页
        5.1.4 主要仪器和设备第96-97页
        5.1.5 质粒抽提、酶切、连接、同源重组等分子生物学操作第97页
        5.1.6 质粒构建第97-98页
        5.1.7 实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测基因的表达变化第98-99页
        5.1.8 不同碳源对产量的影响第99页
        5.1.9 耶罗维解脂酵母的分批补料发酵第99页
    5.2 结果与讨论第99-110页
        5.2.1 URA3筛选系统的测试第99-101页
        5.2.2 工程菌的构建流程第101页
        5.2.3 质粒构建第101-102页
        5.2.4 产 β-胡萝卜素菌株的构建第102-108页
        5.2.5 分批补料发酵生产 β-胡萝卜素第108-110页
    5.3 本章小结第110-112页
第6章 虾青素产生菌株的构建第112-122页
    6.1 材料与方法第113-117页
        6.1.1 引物、菌株与质粒第113-115页
        6.1.2 培养基、试剂、仪器及主要溶液第115页
        6.1.3 主要溶液及培养基配置第115页
        6.1.4 主要仪器和设备第115页
        6.1.5 质粒抽提、酶切、连接、同源重组等分子生物学操作第115页
        6.1.6 质粒构建第115-116页
        6.1.7 耶罗维解脂酵母转化方法第116页
        6.1.8 耶罗维解脂酵母中虾青素的提取与HPLC分析第116-117页
    6.2 结果与讨论第117-121页
        6.2.1 crtW与crtZ的克隆及表达组件的构建第117-118页
        6.2.2 虾青素生产菌株的构建第118-121页
    6.3 本章小结第121-122页
全文总结第122-124页
参考文献第124-138页
创新性分析第138-140页
对进一步研究工作的设想和建议第140-142页
攻读学位期间发表的学术论文与专利申请第142-144页
致谢第144-146页
附录第146-152页

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