| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第7-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-14页 |
| 1.1 谷氨酰胺转胺酶的作用机理 | 第9页 |
| 1.2 谷氨酰胺转氨酶的来源和应用 | 第9-11页 |
| 1.3 谷氨酰胺转胺酶的结构和活化机制 | 第11-12页 |
| 1.4 谷氨酰胺转胺酶的热稳定性研究 | 第12页 |
| 1.5 蛋白质剪接技术 | 第12-13页 |
| 1.6 本论文的研究内容 | 第13-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-24页 |
| 2.1 实验材料 | 第14-17页 |
| 2.1.1 实验菌株与载体 | 第14页 |
| 2.1.2 主要化学试剂 | 第14-15页 |
| 2.1.3 培养基 | 第15页 |
| 2.1.4 主要溶液 | 第15-16页 |
| 2.1.5 主要设备 | 第16页 |
| 2.1.6 实验所用引物 | 第16-17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-24页 |
| 2.2.1 一种 pH 依赖型的内含肽介导谷氨酰胺转胺酶的活化 | 第17-20页 |
| 2.2.2 人工设计二硫键增强谷氨酰胺转胺酶的热稳定性 | 第20-24页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第24-40页 |
| 3.1 一种 pH 依赖型的内含肽介导谷氨酰胺转胺酶的活化 | 第24-32页 |
| 3.1.0 pET-pro-SDB-MTG 及其突变体的载体构建 | 第24-25页 |
| 3.1.1 pro-SDB-MTG 的表达及其 pH 依赖型的活化 | 第25-26页 |
| 3.1.2 pro-SDB-MTG 及其突变体的断裂活性 | 第26-27页 |
| 3.1.3 MTG 的交联能力对蛋白分泌、表达和细胞生长的影响 | 第27-29页 |
| 3.1.4 MTG 及其突变体的酶学性质 | 第29-30页 |
| 3.1.5 MTG 及其突变体的结构分析 | 第30-31页 |
| 3.1.6 S. hygroscopicus 来源的 pro-MTG 中柔性区域的鉴定 | 第31页 |
| 3.1.7 内含肽策略生产 MTG 的优势 | 第31-32页 |
| 3.2 人工设计二硫键增强谷氨酰胺转胺酶的热稳定性 | 第32-40页 |
| 3.2.1 MTG 上二硫键位置的选取及质粒构建 | 第32-34页 |
| 3.2.2 MTG 及其二硫键突变体的表达，活化和纯化 | 第34-35页 |
| 3.2.3 MTG 及其突变体二硫键数量的检测 | 第35页 |
| 3.2.4 MTG 及其突变体的热稳定性比较 | 第35-37页 |
| 3.2.5 MTG 及其突变体的抗胰蛋白酶降解能力的比较 | 第37-38页 |
| 3.2.6 MTG 及其突变体的圆二色谱的比较 | 第38-39页 |
| 3.2.7 MTG 及其突变体的酶学性质比较 | 第39-40页 |
| 主要结论与展望 | 第40-42页 |
| 主要结论 | 第40-41页 |
| 展望 | 第41-42页 |
| 致谢 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-46页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第46页 |
