| 中文摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-21页 |
| 1 乳铁蛋白的概述 | 第10-15页 |
| 1.1 乳铁蛋白的简介 | 第10-14页 |
| 1.2 乳铁蛋白的应用 | 第14-15页 |
| 2 转基因动物乳腺生物反应器的概述 | 第15-17页 |
| 2.1 乳腺生物反应器的简介 | 第15页 |
| 2.2 乳腺生物反应器的制备技术 | 第15-16页 |
| 2.3 乳腺生物反应器的研究进展 | 第16-17页 |
| 3 重组蛋白层析技术概述 | 第17-20页 |
| 3.1 重组蛋白常用层析技术 | 第17-19页 |
| 3.2 重组蛋白层析技术的研究进展 | 第19-20页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 转PCL25/hLF基因克隆奶山羊的制备 | 第21-34页 |
| 1. 材料 | 第21-23页 |
| 1.1 实验材料 | 第21页 |
| 1.2 仪器设备 | 第21-22页 |
| 1.3 主要试剂及溶液配制 | 第22-23页 |
| 2. 方法 | 第23-29页 |
| 2.1 N_(31)的复苏与培养 | 第23页 |
| 2.2 注射用基因片段(zpz-1)的准备 | 第23-24页 |
| 2.3 PCL25/hLF基因导入N_(31)细胞系(细胞显微注射法) | 第24-25页 |
| 2.4 注射贴壁细胞G418筛选和单克隆细胞株挑取 | 第25页 |
| 2.5 PCL25/hLF转基因细胞系的鉴定 | 第25-26页 |
| 2.6 供质羊和寄母羊的准备 | 第26页 |
| 2.7 供核细胞与卵母细胞的准备 | 第26-27页 |
| 2.8 重构胚的制备 | 第27-28页 |
| 2.9 重构胚移植及转基因羊诞生 | 第28页 |
| 2.10 原代PCL25/hLF转基因羊(zp-71)的鉴定 | 第28-29页 |
| 3. 结果 | 第29-32页 |
| 3.1 Sal I和Not I双酶切鉴定 | 第29-30页 |
| 3.2 G418筛选后PCL25/hLF转基因单克隆细胞株的鉴定 | 第30-31页 |
| 3.3 zp-71基因组中PCL25/hLF基因的鉴定 | 第31-32页 |
| 4. 讨论 | 第32-34页 |
| 4.1 细胞显微注射技术与其他基因转染技术相比具有的优势 | 第32-33页 |
| 4.2 转基因克隆动物的应用及安全性问题 | 第33-34页 |
| 第三章 zp-71乳中rhLF的纯化及其活性检测 | 第34-50页 |
| 1. 材料 | 第34-37页 |
| 1.1 实验材料 | 第34页 |
| 1.2 仪器设备 | 第34-35页 |
| 1.3 实验试剂及溶液配制 | 第35-37页 |
| 2. 方法 | 第37-41页 |
| 2.1 ELISA检测转基因羊乳中rhLF表达水平 | 第37-38页 |
| 2.2 阳离子交换层析法纯化转基因羊乳中rhLF | 第38-39页 |
| 2.3 SDS-PAGE电泳分析纯化产物的纯度 | 第39-40页 |
| 2.4 Western Blotting鉴定纯化产物 | 第40-41页 |
| 2.5 抑菌试验分析重组表达产物rhLF的抗菌活性 | 第41页 |
| 3. 结果 | 第41-47页 |
| 3.1 zp-71乳清中rhLF的ELISA检测结果 | 第41-43页 |
| 3.2 阳离子交换层析法纯化zp-71乳清峰图 | 第43-44页 |
| 3.3 阳离子交换层析洗脱产物的ELISA检测结果 | 第44-45页 |
| 3.4 阳离子交换层析洗脱产物的SDS-PAGE电泳及Western Blotting结果 | 第45-46页 |
| 3.5 zp-71乳清及其纯化产物rhLF的抑菌试验结果 | 第46-47页 |
| 4. 讨论 | 第47-50页 |
| 4.1 PCL25/hLF基因能在转基因羊乳腺中持续稳定地表达 | 第47-48页 |
| 4.2 本研究采用的阳离子交换技术的创新性和可行性分析 | 第48-50页 |
| 全文总结 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
