| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-14页 |
| 1.1 碱性淀粉酶定义及性质 | 第8页 |
| 1.2 碱性淀粉酶的生产 | 第8-9页 |
| 1.2.1 产碱性淀粉酶微生物的筛选 | 第8-9页 |
| 1.2.2 野生菌株的诱变育种及发酵优化 | 第9页 |
| 1.2.3 产酶重组微生物的构建 | 第9页 |
| 1.3 枯草芽孢杆菌表达系统 | 第9-12页 |
| 1.3.1 枯草芽孢杆菌表达系统的特点 | 第9-10页 |
| 1.3.2 枯草芽孢杆菌表达系统的信号肽及蛋白质分泌途径 | 第10-11页 |
| 1.3.3 枯草芽孢杆菌表达系统的启动子 | 第11-12页 |
| 1.4 本论文主要研究内容 | 第12-14页 |
| 1.4.1 立题依据 | 第12-13页 |
| 1.4.2 主要研究内容 | 第13-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-24页 |
| 2.1 实验材料 | 第14-19页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第14-16页 |
| 2.1.2 引物 | 第16-17页 |
| 2.1.3 主要试剂与工具酶 | 第17页 |
| 2.1.4 培养基 | 第17页 |
| 2.1.5 相关溶液的配制 | 第17-18页 |
| 2.1.6 仪器与设备 | 第18-19页 |
| 2.2 实验操作方法 | 第19-22页 |
| 2.2.1 分子生物学操作方法 | 第19-21页 |
| 2.2.2 培养方法 | 第21-22页 |
| 2.2.3 常压室温等离子体（ARTP）诱变方法 | 第22页 |
| 2.2.4 高通量筛选方法 | 第22页 |
| 2.3 实验分析方法 | 第22-24页 |
| 2.3.1 重组突变株遗传稳定性测定 | 第22页 |
| 2.3.2 菌体干重测定方法 | 第22页 |
| 2.3.3 蛋白浓度测定方法 | 第22页 |
| 2.3.4 SDS-PAGE条件与分析 | 第22-23页 |
| 2.3.5 碱性淀粉酶酶活力测定 | 第23页 |
| 2.3.6 突变株形态学分析 | 第23-24页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第24-54页 |
| 3.1 B. subtilis WB600等离子体诱变及高通量筛选 | 第24-29页 |
| 3.1.1 ARTP诱变条件的选择 | 第24页 |
| 3.1.2 碱性淀粉酶高产突变株的筛选 | 第24-26页 |
| 3.1.3 突变株B. subtilis mut-12 | 第26-28页 |
| 3.1.4 突变株B. subtilis mut-12 | 第28页 |
| 3.1.5 突变株B. subtilis mut-12 | 第28-29页 |
| 3.2 重组质粒pMA0911-M1-amyK表达宿主比较与分析 | 第29页 |
| 3.3 重组菌株B. subtilis 168 M1ARTP诱变及高通量筛选 | 第29-32页 |
| 3.3.1 重组突变株B. subtilis 168 mut-16 | 第30-31页 |
| 3.3.2 重组突变株B. subtilis 168 mut-16 | 第31-32页 |
| 3.4 重组突变株B. subtilis 168 mut-16 | 第32-42页 |
| 3.4.1 重组突变株B. subtilis 168 mut-16 | 第32-34页 |
| 3.4.2 重组突变株B. subtilis 168 mut-16 | 第34-37页 |
| 3.4.3 重组突变株B. subtilis 168 mut-16 | 第37-39页 |
| 3.4.4 重组突变株B. subtilis 168 mut-16 | 第39-42页 |
| 3.5 B. subtilis信号肽筛选及定向进化 | 第42-47页 |
| 3.5.1 最适产酶信号肽的筛选 | 第42-44页 |
| 3.5.2 信号肽YwbN假定蛋白序列删除 | 第44-45页 |
| 3.5.3 信号肽YwbN1的定向进化 | 第45-47页 |
| 3.6 B. subtilis启动子筛选及定向进化 | 第47-54页 |
| 3.6.1 不同启动子对酶表达的影响 | 第47-48页 |
| 3.6.2 启动子串联对酶表达的影响 | 第48-49页 |
| 3.6.3 最优启动子PHpaII的定向进化 | 第49-50页 |
| 3.6.4 突变株与出发株amyK基因转录水平比较 | 第50-52页 |
| 3.6.5 突变株B. subtilis PM2的发酵罐实验 | 第52-54页 |
| 主要结论与展望 | 第54-56页 |
| 主要结论 | 第54-55页 |
| 展望 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的学术成果 | 第62页 |
