| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 绪论 | 第12-26页 |
| 1.1 溶菌酶的研究进展 | 第12-16页 |
| 1.1.1 溶菌酶的定义 | 第12页 |
| 1.1.2 溶菌酶的结构、理化性质 | 第12-13页 |
| 1.1.3 溶菌酶的主要分类 | 第13页 |
| 1.1.4 溶菌酶的抗菌作用机理 | 第13-14页 |
| 1.1.5 溶菌酶的应用 | 第14-15页 |
| 1.1.5.1 溶菌酶在医疗行业中的应用 | 第14页 |
| 1.1.5.2 溶菌酶在食品行业的应用 | 第14-15页 |
| 1.1.5.3 溶菌酶在畜牧饲料行业中的应用 | 第15页 |
| 1.1.5.4 溶菌酶在科学研究中的应用 | 第15页 |
| 1.1.6 溶菌酶基因工程的研究 | 第15-16页 |
| 1.2 重组蛋白表达系统的研究进展 | 第16-19页 |
| 1.2.1 原核表达系统 | 第16-18页 |
| 1.2.1.1 大肠杆菌表达系统 | 第16-17页 |
| 1.2.1.2 枯草芽孢杆菌表达系统 | 第17-18页 |
| 1.2.2 真核表达系统 | 第18-19页 |
| 1.2.2.1 酵母表达系统 | 第18页 |
| 1.2.2.2 昆虫表达系统 | 第18-19页 |
| 1.2.2.3 哺乳动物细胞表达系统 | 第19页 |
| 1.2.2.4 植物表达系统 | 第19页 |
| 1.3 大肠杆菌中重组蛋白可溶性表达 | 第19-23页 |
| 1.3.1 宿主细胞的选择 | 第20页 |
| 1.3.1.1 选择可溶性表达外源蛋白的宿主 | 第20页 |
| 1.3.1.2 外源蛋白与其他辅助蛋白共表达 | 第20页 |
| 1.3.2 载体选择 | 第20-21页 |
| 1.3.2.1 融合蛋白的构建 | 第20-21页 |
| 1.3.2.2 启动子的选择 | 第21页 |
| 1.3.2.3 分泌表达 | 第21页 |
| 1.3.3 培养条件与诱导方法的选择 | 第21-23页 |
| 1.3.3.1 培养基的组成 | 第21-22页 |
| 1.3.3.2 诱导条件 | 第22-23页 |
| 1.4 蛋白的分离纯化方法 | 第23-24页 |
| 1.4.1 固定金属亲和层析法 | 第23页 |
| 1.4.2 超滤法 | 第23页 |
| 1.4.3 离子交换层析法 | 第23-24页 |
| 1.4.4 凝胶过滤层析 | 第24页 |
| 1.5 研究的主要内容 | 第24页 |
| 1.6 研究的目的及意义 | 第24-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-43页 |
| 2.1 重组溶菌酶基因工程菌株的活化与保存 | 第26-29页 |
| 2.1.1 材料与试剂 | 第26-28页 |
| 2.1.1.1 菌种 | 第26页 |
| 2.1.1.2 主要试剂 | 第26页 |
| 2.1.1.3 培养基 | 第26页 |
| 2.1.1.4 常用溶液及缓冲液 | 第26-28页 |
| 2.1.1.5 主要实验仪器 | 第28页 |
| 2.1.1.6 生物信息学分析的主要软件与数据库 | 第28页 |
| 2.1.2 方法 | 第28-29页 |
| 2.1.2.1 菌种划线培养 | 第28-29页 |
| 2.1.2.2 菌种液体培养 | 第29页 |
| 2.1.2.3 菌种斜面保藏 | 第29页 |
| 2.1.2.4 种子液培养 | 第29页 |
| 2.1.2.5 扩大培养 | 第29页 |
| 2.1.2.6 诱导培养 | 第29页 |
| 2.2 重组质粒的鉴定 | 第29-32页 |
| 2.2.1 材料与试剂 | 第29-30页 |
| 2.2.1.1 菌种 | 第29-30页 |
| 2.2.1.2 酶和试剂 | 第30页 |
| 2.2.1.3 培养基 | 第30页 |
| 2.2.1.4 常用溶液及缓冲液 | 第30页 |
| 2.2.1.5 主要仪器设备 | 第30页 |
| 2.2.2 方法与步骤 | 第30-32页 |
| 2.2.2.1 质粒提取 | 第30-32页 |
| 2.3 重组溶菌酶基因工程菌发酵条件的研究 | 第32-33页 |
| 2.3.1 材料与试剂 | 第32页 |
| 2.3.1.1 菌种 | 第32页 |
| 2.3.1.2 主要试剂 | 第32页 |
| 2.3.1.3 培养基 | 第32页 |
| 2.3.1.4 常用溶液及缓冲液 | 第32页 |
| 2.3.1.5 主要仪器设备 | 第32页 |
| 2.3.2 方法与步骤 | 第32-33页 |
| 2.3.2.1 菌体浓度的研究 | 第32-33页 |
| 2.3.2.2 培养基的研究 | 第33页 |
| 2.3.2.3 接种量研究 | 第33页 |
| 2.3.2.4 填装量的研究 | 第33页 |
| 2.4 重组溶菌酶蛋白可溶性表达条件的研究 | 第33-36页 |
| 2.4.1 材料与试剂 | 第33-34页 |
| 2.4.1.1 菌种 | 第33-34页 |
| 2.4.1.2 主要试剂 | 第34页 |
| 2.4.1.3 培养基 | 第34页 |
| 2.4.1.4 常用溶液及缓冲液 | 第34页 |
| 2.4.1.5 主要仪器设备 | 第34页 |
| 2.4.2 方法与步骤 | 第34-36页 |
| 2.4.2.1 细胞破碎及蛋白质浓度测定方法 | 第34-35页 |
| 2.4.2.2 诱导时间的研究 | 第35-36页 |
| 2.4.2.3 诱导剂浓度的研究 | 第36页 |
| 2.4.2.4 诱导温度的研究 | 第36页 |
| 2.4.2.5 山梨醇和甜菜碱对表达目的蛋白的研究 | 第36页 |
| 2.5 重组溶菌酶蛋白提取方法的研究 | 第36-41页 |
| 2.5.1 材料与试剂 | 第36-37页 |
| 2.5.1.1 主要材料 | 第36页 |
| 2.5.1.2 常用溶液及缓冲液 | 第36-37页 |
| 2.5.1.4 主要仪器设备 | 第37页 |
| 2.5.2 方法与步骤 | 第37-41页 |
| 2.5.2.1 亲和层析法提取目的蛋白的研究 | 第37-39页 |
| 2.5.2.2 超滤法提取目的蛋白的研究 | 第39页 |
| 2.5.2.3 脱盐的研究 | 第39-41页 |
| 2.6 重组溶菌酶生物学活性的研究 | 第41-43页 |
| 2.6.1 材料与试剂 | 第41页 |
| 2.6.1.1 材料 | 第41页 |
| 2.6.1.2 主要材料 | 第41页 |
| 2.6.1.3 常用缓冲液及培养基 | 第41页 |
| 2.6.1.4 主要仪器设备 | 第41页 |
| 2.6.2 方法与步骤 | 第41-43页 |
| 2.6.2.1 重组SjLys蛋白的酶活力测定 | 第41-42页 |
| 2.6.2.2 重组SjLys蛋白部分生物学性质研究 | 第42页 |
| 2.6.2.3 生物活性的测定 | 第42-43页 |
| 第三章 结果与分析 | 第43-57页 |
| 3.1 菌株的筛选 | 第43页 |
| 3.2 重组质粒鉴定 | 第43-44页 |
| 3.3 重组溶菌酶基因工程菌发酵条件分析 | 第44-47页 |
| 3.3.1 菌体浓度的研究 | 第44-45页 |
| 3.3.2 LB/Amp与TB/Amp培养基对表达量的影响 | 第45-46页 |
| 3.3.3 接种量对菌体生长的影响 | 第46-47页 |
| 3.3.4 填装量及摇瓶转速对菌体生长的影响 | 第47页 |
| 3.4 重组溶菌酶蛋白可溶性表达条件分析 | 第47-52页 |
| 3.4.1 蛋白含量的测定 | 第47-48页 |
| 3.4.2 诱导时间的研究 | 第48-49页 |
| 3.4.3 诱导剂浓度的研究 | 第49-50页 |
| 3.4.4 诱导温度的研究 | 第50-51页 |
| 3.4.5 山梨醇和甜菜碱对重组SjLys蛋白表达的影响 | 第51-52页 |
| 3.5 重组溶菌酶蛋白纯化方法分析 | 第52-53页 |
| 3.6 重组溶菌酶的生物学活性分析 | 第53-57页 |
| 3.6.1 最适温度和最适pH的测定 | 第53-54页 |
| 3.6.2 pH稳定性和热稳定性的测定 | 第54-55页 |
| 3.6.3 重组SjLys蛋白抑菌谱检测 | 第55-57页 |
| 第四章 讨论 | 第57-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 附录A 缩略词 | 第67页 |
