| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-15页 |
| 1.1 灵芝多糖的概述 | 第8-10页 |
| 1.1.1 灵芝 | 第8页 |
| 1.1.2 灵芝多糖 | 第8-10页 |
| 1.2 灵芝多糖合成代谢途径中的重要酶 | 第10-11页 |
| 1.2.1 葡萄糖磷酸变位酶 | 第10页 |
| 1.2.2 磷酸甘露糖异构酶 | 第10-11页 |
| 1.2.3 UDP-葡萄糖焦磷酸化酶 | 第11页 |
| 1.3 丝状真菌常用的转化方法 | 第11-13页 |
| 1.3.1 聚乙二醇（PEG）转化法 | 第11页 |
| 1.3.2 电激转化法 | 第11-12页 |
| 1.3.3 基因枪转化法 | 第12页 |
| 1.3.4 根癌农杆菌转化法（ATMT） | 第12-13页 |
| 1.4 扫描电镜（SEM）与透射电镜（TEM）技术 | 第13-14页 |
| 1.5 本课题的研究背景与意义 | 第14页 |
| 1.6 本课题的研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-22页 |
| 2.1 菌株与培养条件 | 第15页 |
| 2.2 培养基配方 | 第15-16页 |
| 2.3 载体构建 | 第16-17页 |
| 2.3.1 聚合酶链式反应（PCR） | 第16页 |
| 2.3.2 同源重组法载体构建 | 第16页 |
| 2.3.3 质粒转化大肠杆菌 | 第16页 |
| 2.3.4 酵母感受态细胞的制备与转化 | 第16-17页 |
| 2.3.5 目的基因pgm与pmi在毕赤酵母的异源表达 | 第17页 |
| 2.4 灵芝原生质体制备及T-DNA转化 | 第17-18页 |
| 2.4.1 原生质体的制备 | 第17页 |
| 2.4.2 载体农杆菌转化（冻融法） | 第17-18页 |
| 2.4.3 农杆菌介导（ATMT）的灵芝原生质体转化 | 第18页 |
| 2.5 重组型灵芝菌株多糖及酶的分析 | 第18-20页 |
| 2.5.1 灵芝菌体生物量及碳源消耗的测定 | 第18页 |
| 2.5.2 灵芝胞外多糖（EPS）及胞内多糖（IPS）的测定 | 第18页 |
| 2.5.3 灵芝多糖单糖组成的研究 | 第18页 |
| 2.5.4 灵芝多糖代谢途径的酶活测定 | 第18-19页 |
| 2.5.5 多糖代谢途径中相关酶基因转录水平的测定 | 第19-20页 |
| 2.6 灵芝重组菌株菌体形态的分析方法 | 第20-22页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第22-39页 |
| 3.1 重组载体构建及灵芝重组菌株的筛选 | 第22-25页 |
| 3.1.1 Pgpd启动子、Msdh B以及目的基因的克隆 | 第22-23页 |
| 3.1.2 目的基因在毕赤酵母GS115的异源表达 | 第23-24页 |
| 3.1.3 二元载体的构建 | 第24页 |
| 3.1.4 ATMT法转化灵芝原生质体 | 第24-25页 |
| 3.2 重组菌株菌体生长、多糖产量与性质及相关酶的研究 | 第25-34页 |
| 3.2.1 重组菌株菌体生长的研究 | 第25页 |
| 3.2.2 重组菌株胞外多糖产量及胞内多糖含量的研究 | 第25-27页 |
| 3.2.3 重组灵芝菌株多糖中单糖组分的研究 | 第27-29页 |
| 3.2.4 重组型灵芝菌株多糖合成途径中相关酶基因表达量的研究 | 第29-31页 |
| 3.2.5 重组灵芝菌株多糖合成途径中相关酶的研究 | 第31-34页 |
| 3.3 重组菌株菌体形态及细胞超微结构的研究 | 第34-39页 |
| 3.3.1 重组菌株菌体扫描电镜（SEM）结果分析 | 第34-35页 |
| 3.3.2 重组菌株菌体透射电镜（TEM）结果分析 | 第35-39页 |
| 主要结论与展望 | 第39-41页 |
| 主要结论 | 第39-40页 |
| 展望 | 第40-41页 |
| 致谢 | 第41-47页 |
| 附录A: 单糖组成气相色谱图 | 第47-49页 |
| 附录B：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第49页 |
