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灵芝多糖合成途径关键酶基因过表达的研究

摘要第3-4页
Abstract第4-5页
第一章 绪论第8-15页
    1.1 灵芝多糖的概述第8-10页
        1.1.1 灵芝第8页
        1.1.2 灵芝多糖第8-10页
    1.2 灵芝多糖合成代谢途径中的重要酶第10-11页
        1.2.1 葡萄糖磷酸变位酶第10页
        1.2.2 磷酸甘露糖异构酶第10-11页
        1.2.3 UDP-葡萄糖焦磷酸化酶第11页
    1.3 丝状真菌常用的转化方法第11-13页
        1.3.1 聚乙二醇(PEG)转化法第11页
        1.3.2 电激转化法第11-12页
        1.3.3 基因枪转化法第12页
        1.3.4 根癌农杆菌转化法(ATMT)第12-13页
    1.4 扫描电镜(SEM)与透射电镜(TEM)技术第13-14页
    1.5 本课题的研究背景与意义第14页
    1.6 本课题的研究内容第14-15页
第二章 材料与方法第15-22页
    2.1 菌株与培养条件第15页
    2.2 培养基配方第15-16页
    2.3 载体构建第16-17页
        2.3.1 聚合酶链式反应(PCR)第16页
        2.3.2 同源重组法载体构建第16页
        2.3.3 质粒转化大肠杆菌第16页
        2.3.4 酵母感受态细胞的制备与转化第16-17页
        2.3.5 目的基因pgm与pmi在毕赤酵母的异源表达第17页
    2.4 灵芝原生质体制备及T-DNA转化第17-18页
        2.4.1 原生质体的制备第17页
        2.4.2 载体农杆菌转化(冻融法)第17-18页
        2.4.3 农杆菌介导(ATMT)的灵芝原生质体转化第18页
    2.5 重组型灵芝菌株多糖及酶的分析第18-20页
        2.5.1 灵芝菌体生物量及碳源消耗的测定第18页
        2.5.2 灵芝胞外多糖(EPS)及胞内多糖(IPS)的测定第18页
        2.5.3 灵芝多糖单糖组成的研究第18页
        2.5.4 灵芝多糖代谢途径的酶活测定第18-19页
        2.5.5 多糖代谢途径中相关酶基因转录水平的测定第19-20页
    2.6 灵芝重组菌株菌体形态的分析方法第20-22页
第三章 结果与讨论第22-39页
    3.1 重组载体构建及灵芝重组菌株的筛选第22-25页
        3.1.1 Pgpd启动子、Msdh B以及目的基因的克隆第22-23页
        3.1.2 目的基因在毕赤酵母GS115的异源表达第23-24页
        3.1.3 二元载体的构建第24页
        3.1.4 ATMT法转化灵芝原生质体第24-25页
    3.2 重组菌株菌体生长、多糖产量与性质及相关酶的研究第25-34页
        3.2.1 重组菌株菌体生长的研究第25页
        3.2.2 重组菌株胞外多糖产量及胞内多糖含量的研究第25-27页
        3.2.3 重组灵芝菌株多糖中单糖组分的研究第27-29页
        3.2.4 重组型灵芝菌株多糖合成途径中相关酶基因表达量的研究第29-31页
        3.2.5 重组灵芝菌株多糖合成途径中相关酶的研究第31-34页
    3.3 重组菌株菌体形态及细胞超微结构的研究第34-39页
        3.3.1 重组菌株菌体扫描电镜(SEM)结果分析第34-35页
        3.3.2 重组菌株菌体透射电镜(TEM)结果分析第35-39页
主要结论与展望第39-41页
    主要结论第39-40页
    展望第40-41页
致谢第41-47页
附录A: 单糖组成气相色谱图第47-49页
附录B:作者在攻读硕士学位期间发表的论文第49页

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