产苯丙氨酸解氨酶菌株筛选、重组菌构建及发酵工艺研究
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 目录 | 第5-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-13页 |
| ·苯丙氨酸解氨酶的发现与研究进展 | 第7页 |
| ·PAL 的来源与分布 | 第7页 |
| ·植物中 PAL 的分布 | 第7页 |
| ·微生物来源的 PAL | 第7页 |
| ·PAL 的理化性质与作用机理 | 第7-8页 |
| ·PAL 酶源菌株的选育 | 第8-9页 |
| ·PAL 的分子学研究进展 | 第9-10页 |
| ·原核表达系统 | 第9-10页 |
| ·真核表达系统 | 第10页 |
| ·PAL 的生理作用及应用价值 | 第10-11页 |
| ·PAL 在植物中的生理作用 | 第10-11页 |
| ·PAL 的临床医学价值及工业应用 | 第11页 |
| ·本课题的研究目的及内容 | 第11-13页 |
| 第二章 材料与方法 | 第13-21页 |
| ·实验材料 | 第13-14页 |
| ·菌株与质粒 | 第13页 |
| ·主要生化和分子生物学试剂 | 第13页 |
| ·培养基 | 第13-14页 |
| ·试剂溶液 | 第14页 |
| ·主要设备和仪器 | 第14页 |
| ·实验方法 | 第14-21页 |
| ·产苯丙氨酸解氨酶菌株的筛选 | 第14-15页 |
| ·菌株鉴定 | 第15页 |
| ·酵母的液体培养及诱导产酶情况 | 第15-16页 |
| ·酵母总 RNA 提取 | 第16-17页 |
| ·pal 基因的克隆 | 第17页 |
| ·pal 在大肠杆菌中表达 | 第17-18页 |
| ·pal 在毕赤酵母中表达 | 第18页 |
| ·分析方法 | 第18-21页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第21-49页 |
| ·苯丙氨酸解氨酶菌株的筛选 | 第21-24页 |
| ·产酶菌株筛选 | 第21-22页 |
| ·菌株 Y01 鉴定 | 第22-23页 |
| ·红冬孢酵母 Y01 生长曲线及产酶曲线的测定 | 第23-24页 |
| ·pal 基因的克隆及表达 | 第24-31页 |
| ·酵母总 RNA 提取方法比较 | 第24-26页 |
| ·反转录及 pal 基因的克隆 | 第26-27页 |
| ·pal 基因在原核系统中的表达 | 第27-29页 |
| ·pal 基因在真核系统中的表达 | 第29-31页 |
| ·摇瓶条件下重组大肠杆菌产酶条件的初步研究 | 第31-39页 |
| ·重组大肠杆菌生长曲线 | 第31-32页 |
| ·重组菌质粒稳定性 | 第32页 |
| ·利用 IPTG 进行诱导时产酶情况的研究 | 第32-34页 |
| ·培养基的选择 | 第34-35页 |
| ·培养基碳源的优化 | 第35-37页 |
| ·诱导物的选择 | 第37-38页 |
| ·乳糖诱导浓度 | 第38页 |
| ·乳糖诱导的最适温度 | 第38-39页 |
| ·15 L 发酵罐实验 | 第39-45页 |
| ·采用 LB 培养基进行 15 L 分批发酵实验 | 第39-40页 |
| ·采用 TB 培养基进行 15 L 分批发酵实验 | 第40-45页 |
| ·重组大肠杆菌生物转化实验 | 第45-49页 |
| 主要结论与展望 | 第49-51页 |
| 主要结论 | 第49页 |
| 展望 | 第49-51页 |
| 致谢 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第59页 |
