| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 目录 | 第5-7页 |
| 第一章 前言 | 第7-15页 |
| ·磷脂酶 | 第7-8页 |
| ·磷脂酶 C 的简介 | 第8-10页 |
| ·磷脂酶 C 的应用 | 第10-11页 |
| ·微生物磷脂酶 C 的研究现状 | 第11-13页 |
| ·表达体系的研究 | 第13页 |
| ·本课题的立题意义与研究内容 | 第13-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-23页 |
| ·实验材料 | 第15-17页 |
| ·菌株与质粒 | 第15页 |
| ·主要生化和分子生物学试剂 | 第15页 |
| ·培养基 | 第15页 |
| ·溶液的配制 | 第15-16页 |
| ·主要仪器 | 第16-17页 |
| ·方法 | 第17-23页 |
| ·产磷脂酶 C 菌株筛选 | 第17页 |
| ·B.cereus 12 发酵条件的优化方法 | 第17页 |
| ·细菌基因组 DNA 的提取 | 第17页 |
| ·引物设计与合成 | 第17-18页 |
| ·磷脂酶 C 基因的克隆 | 第18页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备及转化方法 | 第18页 |
| ·重组大肠杆菌的构建 | 第18页 |
| ·重组大肠杆菌的诱导表达及鉴定 | 第18-19页 |
| ·重组大肠杆菌生长曲线的测定 | 第19页 |
| ·重组大肠杆菌诱导条件的初步优化方法 | 第19页 |
| ·大肠杆菌重组蛋白的纯化 | 第19-20页 |
| ·毕赤酵母表达质粒的构建 | 第20页 |
| ·毕赤酵母感受态的制备及转化方法 | 第20页 |
| ·多拷贝重组子的筛选 | 第20页 |
| ·重组毕赤酵母的诱导表达 | 第20页 |
| ·磷脂酶 C 酶活力的测定 | 第20-21页 |
| ·生物量的测定 | 第21页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第21页 |
| ·常见其他分子克隆操作 | 第21-23页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第23-45页 |
| ·产磷脂酶 C 菌株的筛选及发酵条件优化 | 第23-30页 |
| ·产磷脂酶 C 菌株的筛选 | 第23-24页 |
| ·B.cereus 12 发酵条件的研究 | 第24-30页 |
| ·磷脂酶 C 基因在大肠杆菌中的克隆表达 | 第30-40页 |
| ·PC-PLC 基因的克隆与分析 | 第30-31页 |
| ·重组表达质粒的构建及验证 | 第31-33页 |
| ·重组菌的诱导表达及活性鉴定 | 第33-34页 |
| ·重组菌诱导条件的优化 | 第34-37页 |
| ·重组大肠杆菌磷脂酶 C 酶学性质的研究 | 第37-40页 |
| ·大肠杆菌重组蛋白的纯化 | 第40页 |
| ·PLC 基因在毕赤酵母中的初步表达 | 第40-45页 |
| ·重组表达质粒 pPIC9K-pcplc1 和 pPIC9K-pcplc2 的构建 | 第41-42页 |
| ·重组毕赤酵母的构建 | 第42-43页 |
| ·重组毕赤酵母的初步诱导表达 | 第43-45页 |
| 主要结论与展望 | 第45-47页 |
| 主要结论 | 第45页 |
| 展望 | 第45-47页 |
| 致谢 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 附录： 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第54页 |