| 摘要 | 第10-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 英文缩略词表 | 第16-17页 |
| 前言 | 第17-18页 |
| 第一部分 文献综述 | 第18-32页 |
| 第一章 桔青霉素及其检测方法 | 第19-24页 |
| 1 桔青霉素概述 | 第19-21页 |
| 1.1 桔青霉素的理化性质 | 第19-20页 |
| 1.2 桔青霉素的毒性和抑菌性 | 第20-21页 |
| 1.3 桔青霉素的限量标准 | 第21页 |
| 2 桔青霉素的检测方法 | 第21-23页 |
| 2.1 薄层层析法 | 第22页 |
| 2.2 高效液相色谱法 | 第22页 |
| 2.3 酶联免疫吸附测定法 | 第22-23页 |
| 3 小结 | 第23-24页 |
| 第二章 抗体制备研究进展 | 第24-32页 |
| 1 抗体制备概述 | 第24-25页 |
| 1.1 多克隆抗体的制备 | 第24页 |
| 1.2 单克隆抗体的制备 | 第24-25页 |
| 1.3 基因工程重组抗体的制备 | 第25页 |
| 2 抗体库技术 | 第25-31页 |
| 2.1 噬菌体展示技术 | 第26-27页 |
| 2.2 核糖体展示技术 | 第27-31页 |
| 3 小结 | 第31-32页 |
| 第二部分 研究内容 | 第32-105页 |
| 第三章 桔青霉素完全抗原的合成与鉴定 | 第33-43页 |
| 摘要 | 第33-34页 |
| 1 材料和方法 | 第34-37页 |
| 1.1 材料 | 第34-35页 |
| 1.1.1 主要试剂 | 第34页 |
| 1.1.2 主要仪器 | 第34-35页 |
| 1.2 方法 | 第35-37页 |
| 1.2.1 桔青霉素人工完全抗原的合成 | 第35-36页 |
| 1.2.2 桔青霉素人工完全抗原的紫外光谱分析鉴定 | 第36页 |
| 1.2.3 桔青霉素人工完全抗原的SDS-PAGE鉴定 | 第36-37页 |
| 1.2.4 桔青霉素人工完全抗原的MALDI-TOF鉴定以及偶联比的测定 | 第37页 |
| 2 结果 | 第37-39页 |
| 2.1 桔青霉素及人工抗原的紫外光谱分析鉴定结果 | 第37-38页 |
| 2.2 人工完全抗原的SDS-PAGE鉴定结果 | 第38-39页 |
| 2.3 人工完全抗原的质谱鉴定结果 | 第39页 |
| 3 讨论 | 第39-43页 |
| 第四章 桔青霉素单克隆抗体的制备及鉴定 | 第43-75页 |
| 摘要 | 第43-44页 |
| 1 材料和方法 | 第44-57页 |
| 1.1 材料 | 第44-45页 |
| 1.1.1 主要试剂和耗材 | 第44页 |
| 1.1.2 实验动物 | 第44页 |
| 1.1.3 细胞系 | 第44-45页 |
| 1.1.4 主要仪器 | 第45页 |
| 1.1.5 主要试剂的配制 | 第45页 |
| 1.2 方法 | 第45-57页 |
| 1.2.1 Bradford法测蛋白质浓度 | 第45页 |
| 1.2.2 动物免疫 | 第45-46页 |
| 1.2.3 免疫小鼠血清效价测定 | 第46-48页 |
| 1.2.4 单克隆抗体的制备与鉴定 | 第48-57页 |
| 2 结果 | 第57-71页 |
| 2.1 蛋白浓度的测定 | 第57-58页 |
| 2.2 免疫小鼠血清效价的测定 | 第58-59页 |
| 2.3 间接ELISA检测方法的建立 | 第59-62页 |
| 2.4 间接竞争ELISA检测多抗血清的抑制性 | 第62页 |
| 2.5 单克隆抗体细胞株的筛选与建立 | 第62-71页 |
| 3 讨论 | 第71-75页 |
| 第五章 大容量天然鼠源核糖体展示单链抗体文库的构建与初步鉴定 | 第75-86页 |
| 摘要 | 第75-76页 |
| 1 材料和方法 | 第76-79页 |
| 1.1 材料 | 第76页 |
| 1.1.1 主要试剂 | 第76页 |
| 1.1.2 主要仪器 | 第76页 |
| 1.2 方法 | 第76-79页 |
| 1.2.1 小鼠脾脏总RNA的提取 | 第76-77页 |
| 1.2.2 cDNA的合成 | 第77页 |
| 1.2.3 VH、Linker、VL和Cκ基因的扩增 | 第77页 |
| 1.2.4 单链抗体scFv基因文库的组装和序列多样性分析 | 第77-79页 |
| 1.2.5 核糖体展示基因文库的组装和序列分析 | 第79页 |
| 2 结果 | 第79-83页 |
| 2.1 VH、Linker、VL和Cκ基因的扩增与鉴定 | 第79-82页 |
| 2.2 单链抗体scFv基因文库的扩增和序列多样性分析鉴定 | 第82页 |
| 2.3 核糖体展示基因文库的扩增和序列分析鉴定 | 第82-83页 |
| 3 讨论 | 第83-86页 |
| 第六章 核糖体展示技术筛选抗桔青霉素的特异性单链抗体 | 第86-105页 |
| 摘要 | 第86-87页 |
| 1 材料和方法 | 第87-96页 |
| 1.1 材料 | 第87-88页 |
| 1.1.1 主要试剂 | 第87-88页 |
| 1.1.2 主要仪器 | 第88页 |
| 1.1.3 主要试剂的配制 | 第88页 |
| 1.2 方法 | 第88-96页 |
| 1.2.1 核糖体展示基因文库的体外转录翻译 | 第88-89页 |
| 1.2.2 固相亲和筛选 | 第89-90页 |
| 1.2.3 原位反转录回收 | 第90-91页 |
| 1.2.4 PCR扩增及新一轮展示模板的构建 | 第91页 |
| 1.2.5 筛选后单链抗体基因克隆的筛选 | 第91页 |
| 1.2.6 单链抗体基因的原核表达与鉴定 | 第91-94页 |
| 1.2.7 抗桔青霉素单链抗体的筛选与鉴定 | 第94-95页 |
| 1.2.8 抗桔青霉素单链抗体基因序列比对分析 | 第95-96页 |
| 2 结果 | 第96-101页 |
| 2.1 体外转录翻译与亲和筛选 | 第96-97页 |
| 2.2 单链抗体基因克隆的筛选 | 第97页 |
| 2.3 单链抗体基因的原核表达与Western blot鉴定 | 第97-98页 |
| 2.4 抗桔青霉素单链抗体结合活性的鉴定 | 第98-99页 |
| 2.5 抗桔青霉素单链抗体竞争抑制效果与特异性的鉴定 | 第99-101页 |
| 2.6 抗桔青霉素单链抗体基因序列的比对分析 | 第101页 |
| 3 讨论 | 第101-105页 |
| 结论 | 第105-106页 |
| 创新点 | 第106-107页 |
| 展望 | 第107-108页 |
| 附录Ⅰ 溶液配制 | 第108-113页 |
| 参考文献 | 第113-122页 |
| 攻读博士学位期间的主要成果 | 第122-123页 |
| 致谢 | 第123页 |
