| 中文摘要 | 第2-3页 |
| ABSTRACT | 第3页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-34页 |
| 1.1 核黄素的理化性质、功能和用途 | 第9-10页 |
| 1.1.1 核黄素的理化性质 | 第9页 |
| 1.1.2 核黄素的功能和用途 | 第9-10页 |
| 1.2 核黄素的生产现状及方法 | 第10-12页 |
| 1.2.1 全化学合成法 | 第10页 |
| 1.2.2 化学半合成法 | 第10-11页 |
| 1.2.3 微生物发酵法 | 第11-12页 |
| 1.3 核黄素的生物合成途径 | 第12-14页 |
| 1.4 核黄素操纵子的结构 | 第14-15页 |
| 1.5 核黄素操纵子结构基因所编码的酶的功能 | 第15-16页 |
| 1.6 核黄素生物合成途径中的代谢调节机制 | 第16-18页 |
| 1.6.1 前体物 GTP 合成的代谢调节机制 | 第16页 |
| 1.6.2 核黄素操纵子表达的调节机制 | 第16-18页 |
| 1.7 核黄素高产菌的育种思路和方法 | 第18-21页 |
| 1.8 产核黄素基因工程菌构建的进展和国内外研究现状 | 第21-22页 |
| 1.9 代谢工程 | 第22-31页 |
| 1.9.1 后基因组时代的代谢工程--机遇与挑战 | 第22-23页 |
| 1.9.2 DNA 重排在代谢工程中的应用 | 第23-25页 |
| 1.9.3 基因组重排在代谢工程中的应用 | 第25-27页 |
| 1.9.4 基于基因组重排的代谢工程 | 第27-28页 |
| 1.9.5 代谢途径分析 | 第28-30页 |
| 1.9.6 重组枯草芽孢杆菌合成核黄素的代谢工程 | 第30-31页 |
| 1.10 选题背景和主要研究内容 | 第31-34页 |
| 第二章 基因组重排在 B.subtilis 24 性能改进中的初步应用及其 recA+菌株的构建 | 第34-51页 |
| 2.1 实验材料 | 第34-39页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第34-35页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第35-36页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第36-37页 |
| 2.1.4 培养基 | 第37-38页 |
| 2.1.5 主要溶液 | 第38-39页 |
| 2.2 实验方法 | 第39-43页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第43-50页 |
| 2.3.1 通过基因组重排筛选 recA+菌株 | 第43-46页 |
| 2.3.2 通过基因工程技术筛选 recA+菌株 | 第46-49页 |
| 2.3.3 B.subtilis 24R7 与 B.subtilis RH13 的特性比较 | 第49-50页 |
| 2.4 本章小结 | 第50-51页 |
| 第三章 整合型核黄素质粒在染色体上的整合和扩增 | 第51-69页 |
| 3.1 实验材料 | 第54-57页 |
| 3.1.1 菌种和质粒 | 第54-55页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第55页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第55-56页 |
| 3.1.4 培养基 | 第56页 |
| 3.1.5 主要溶液 | 第56-57页 |
| 3.2 实验方法 | 第57-59页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第59-68页 |
| 3.3.1 枯草芽孢杆菌核黄素操纵子的PCR扩增 | 第59页 |
| 3.3.2 PCR 扩增产物的鉴定 | 第59-61页 |
| 3.3.3 整合型核黄素质粒的构建 | 第61-62页 |
| 3.3.4 整合型核黄素质粒在枯草芽孢杆菌中的转化 | 第62-66页 |
| 3.3.5 整合型核黄素质粒在枯草芽孢杆菌中的扩增 | 第66-67页 |
| 3.3.6 整合型核黄素质粒在枯草芽孢杆菌中的多位点整合 | 第67-68页 |
| 3.4 本章小结 | 第68-69页 |
| 第四章 B.subtilis 游离型核黄素质粒的构建及稳定性的研究 | 第69-82页 |
| 4.1 实验材料 | 第70-72页 |
| 4.1.1 菌种和质粒 | 第70-71页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第71页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第71页 |
| 4.1.4 培养基 | 第71页 |
| 4.1.5 主要溶液 | 第71-72页 |
| 4.2 实验方法 | 第72-74页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第74-80页 |
| 4.3.1 克隆载体在 B.subtilis 中的稳定性比较 | 第74-75页 |
| 4.3.2 核黄素质粒 pMX45 的提取和酶切鉴定 | 第75页 |
| 4.3.3 核黄素操纵子的 PCR 扩增 | 第75页 |
| 4.3.4 游离型核黄素质粒的构建 | 第75-76页 |
| 4.3.5 游离型核黄素质粒在枯草芽孢杆菌中的转化 | 第76-78页 |
| 4.3.6 pMX45 和 pRB49 对核黄素合成的影响 | 第78-79页 |
| 4.3.7 核黄素质粒的稳定性 | 第79-80页 |
| 4.4 本章小结 | 第80-82页 |
| 第五章 通过第二轮基因组重排进一步改进产核黄素 B.subtilis 的性能 | 第82-98页 |
| 5.1 实验材料 | 第82-84页 |
| 5.1.1 菌种及质粒 | 第82-83页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第83页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第83-84页 |
| 5.1.4 培养基 | 第84页 |
| 5.1.5 主要溶液 | 第84页 |
| 5.2 实验方法 | 第84-86页 |
| 5.3 实验结果与讨论 | 第86-97页 |
| 5.3.1 通过基因组重排筛选筛选 B.subtilis RH33/pMX45 | 第86-88页 |
| 5.3.2 B.subtilis RH33/pMX45 和部分亲株发酵的初步比较 | 第88-92页 |
| 5.3.3 基因组重排后菌株的有益性状的组合 | 第92页 |
| 5.3.4 B.subtilis RH33/pMX45 recA 缺陷株的构建 | 第92-96页 |
| 5.3.5 B.subtilis RH33 A7/pMX45 的发酵 | 第96页 |
| 5.3.6 B.subtilis RH33 A7/pMX45 中核黄素质粒的稳定性 | 第96-97页 |
| 5.4 本章小结 | 第97-98页 |
| 第六章 基因组重排前后产核黄素 B.subtilis 的代谢通量分析 | 第98-113页 |
| 6.1 实验材料 | 第99-101页 |
| 6.1.1 菌种 | 第99-100页 |
| 6.1.2 主要仪器 | 第100页 |
| 6.1.3 主要试剂 | 第100页 |
| 6.1.4 培养基 | 第100页 |
| 6.1.5 主要溶液 | 第100-101页 |
| 6.2 实验方法 | 第101-104页 |
| 6.2.1 发酵罐发酵培养方法 | 第101页 |
| 6.2.2 取样分析方法 | 第101页 |
| 6.2.3 B.subtilis 生化反应网络的建立 | 第101-103页 |
| 6.2.4 B.subtilis 生物量组分的确定 | 第103-104页 |
| 6.2.5 B.subtilis 代谢通量平衡模型的建立 | 第104页 |
| 6.2.6 拟稳态方程组的求解 | 第104页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第104-112页 |
| 6.3.1 B.subtilis 代谢通量平衡模型 | 第104-107页 |
| 6.3.2 产核黄素 B.subtilis 在间歇培养条件下的代谢通量分布 | 第107-109页 |
| 6.3.3 产核黄素 B.subtilis 在间歇培养条件下的代谢通量比较 | 第109-111页 |
| 6.3.4 产核黄素 B.subtilis 在间歇培养条件下的能量分析 | 第111-112页 |
| 6.5 本章小结 | 第112-113页 |
| 第七章 结论与展望 | 第113-116页 |
| 7.1 结论和创新点 | 第113-114页 |
| 7.2 展望 | 第114-116页 |
| 参考文献 | 第116-126页 |
| 附 录 | 第126-128页 |
| 论文发表 | 第128-129页 |
| 致 谢 | 第129页 |
