| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 综述 | 第10-20页 |
| 1.1 产志贺毒素大肠杆菌 | 第10-11页 |
| 1.1.1 产志贺毒素大肠杆菌的概况 | 第10-11页 |
| 1.1.2 产志贺毒素大肠杆菌危害 | 第11页 |
| 1.2 产志贺毒素大肠杆菌的致病毒素 | 第11-12页 |
| 1.2.1 志贺毒素（STX） | 第11-12页 |
| 1.2.2 紧密素粘附因子 | 第12页 |
| 1.2.3 溶血素（hemolysin） | 第12页 |
| 1.3 产志贺毒素大肠杆菌检测方法的研究进展 | 第12-16页 |
| 1.3.1 常规方法检测鉴定方法 | 第12-13页 |
| 1.3.2 主要PCR检测技术 | 第13-14页 |
| 1.3.2.1 实时荧光PCR方法（Real-Time PCR） | 第13-14页 |
| 1.3.2.2 环介导等温扩增方法（LAMP） | 第14页 |
| 1.3.2.3 多重PCR技术 | 第14页 |
| 1.3.3 免疫学检测方法 | 第14-16页 |
| 1.3.3.1 酶联免疫吸附方法（ELISA） | 第14-15页 |
| 1.3.3.2 免疫荧光抗体方法（Indirect immunofluorescence） | 第15页 |
| 1.3.3.3 免疫胶体金方法（Immune colloidal gold technique） | 第15-16页 |
| 1.3.4 基因芯片检测方法 | 第16页 |
| 1.4 多重PCR-DHPLC方法的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.4.1 多重PCR-DHPLC方法简介 | 第16-17页 |
| 1.4.2 多重PCR-DHPLC方法的应用 | 第17页 |
| 1.4.3 多重PCR-DHPLC方法检测产志贺毒素大肠杆菌的意义 | 第17-18页 |
| 1.5 MALDI-TOF MS方法的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.5.1 MALDI-TOF MS方法简介 | 第18页 |
| 1.5.2 MALDI-TOF MS方法的应用 | 第18-19页 |
| 1.5.3 MALDI-TOF MS方法检测产志贺毒素大肠杆菌的意义 | 第19页 |
| 1.6 本论文研究的内容及意义 | 第19-20页 |
| 第二章 产志贺毒素大肠杆菌检测方法的建立 | 第20-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 实验菌株 | 第20-21页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第21页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.4 主要培养基 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-32页 |
| 2.2.1 标准菌株的活化 | 第22页 |
| 2.2.2 产志贺毒素大肠杆菌的分离 | 第22-24页 |
| 2.2.2.1 初始菌落计数 | 第23页 |
| 2.2.2.2 免疫磁珠富集 | 第23页 |
| 2.2.2.3 O111和O157的免疫磁珠特异性验证 | 第23-24页 |
| 2.2.2.4 O111和O157的免疫磁珠标准菌液灵敏度 | 第24页 |
| 2.2.2.5 O111和O157的免疫磁珠混合菌液灵敏度 | 第24页 |
| 2.2.3 目标菌株的生化鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2.3.1 EMB平板、O157显色培养基以及三糖铁斜面鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2.3.2 VIDAS全自动免疫荧光分析仪 | 第25页 |
| 2.2.3.3 全自动细菌PHOENIX-100生化鉴定仪 | 第25页 |
| 2.2.3.4 VITEK全自动微生物鉴定仪 | 第25页 |
| 2.2.3.5 血清型凝集鉴定 | 第25页 |
| 2.2.3.6 大肠杆菌/大肠菌群 3M纸片法检测 | 第25页 |
| 2.2.4 多重PCR-DHPLC检测鉴定目标菌株 | 第25-28页 |
| 2.2.4.1 目标菌株及参照菌株基因组DNA的提取。 | 第26页 |
| 2.2.4.2 多重PCR特异性引物与RT-PCR特异性引物及探针的合成 | 第26-27页 |
| 2.2.4.3 多重PCR-DHPLC与RT-PCR检测条件优化 | 第27页 |
| 2.2.4.4 多重PCR-DHPLC与RT-PCR特异性验证 | 第27页 |
| 2.2.4.5 多重PCR-DHPLC与RT-PCR灵敏度验证 | 第27页 |
| 2.2.4.6 多重PCR-DHPLC与RT-PCR重现性验证 | 第27-28页 |
| 2.2.4.7 实际样品检测 | 第28页 |
| 2.2.5 MALDI-TOF MS检测鉴定目标菌株方法建立 | 第28-30页 |
| 2.2.5.1 所试菌株培养 | 第28页 |
| 2.2.5.2 基质溶液配置 | 第28页 |
| 2.2.5.3 MALDI-TOF MS的操作步骤 | 第28页 |
| 2.2.5.4 仪器参数设置 | 第28-29页 |
| 2.2.5.5 结果判断标准 | 第29页 |
| 2.2.5.6 前期处理方法 | 第29页 |
| 2.2.5.7 质谱图生成影响因素分析 | 第29-30页 |
| 2.2.5.8 鉴定结果准确性验证试验 | 第30页 |
| 2.2.6 展开全国实验室能力验证 | 第30-32页 |
| 2.2.6.1 能力验证样品制备 | 第30页 |
| 2.2.6.2 能力验证样品均匀性检验分析 | 第30页 |
| 2.2.6.3 能力验证样品稳定性检验分析 | 第30页 |
| 2.2.6.4 能力验证样品全国展开 | 第30-32页 |
| 第三章 产志贺毒素大肠杆菌检测方法的结果与讨论 | 第32-48页 |
| 3.1 分离试验结果 | 第32页 |
| 3.1.1 O111和O157的免疫磁珠特异性 | 第32页 |
| 3.1.2 O111和O157的免疫磁珠标准菌液灵敏度 | 第32页 |
| 3.1.3 O111和O157的免疫磁珠混合菌液灵敏度 | 第32页 |
| 3.2 标准菌株的生化鉴定结果 | 第32-38页 |
| 3.2.1 O157显色培养基、EMB平板以及三糖铁斜面验证结果 | 第32-34页 |
| 3.2.2 VIDAS全自动免疫荧光分析仪 | 第34页 |
| 3.2.3 全自动细菌PHOENIX-100生化鉴定仪 | 第34页 |
| 3.2.4 VITEK全自动微生物鉴定仪 | 第34-37页 |
| 3.2.5 大肠杆菌/大肠菌群 3M纸片法检测 | 第37页 |
| 3.2.6 血清型凝集鉴定 | 第37-38页 |
| 3.3 多重PCR-DHPLC与RT-PCR检测 | 第38-41页 |
| 3.3.1 菌落计数 | 第38页 |
| 3.3.2 多重PCR-DHPLC与RT-PCR检测鉴定目标菌株特异性 | 第38-39页 |
| 3.3.3 多重PCR-DHPLC与RT-PCR检测鉴定目标菌株灵敏度 | 第39-40页 |
| 3.3.4 多重PCR-DHPLC与RT-PCR检测鉴定目标菌株重复性 | 第40页 |
| 3.3.5 多重PCR-DHPLC与RT-PCR实际样品检测结果 | 第40-41页 |
| 3.4 MALDI-TOF MS检测鉴定目标菌株方法结果 | 第41-46页 |
| 3.4.1 前期处理方法影响分析 | 第41-42页 |
| 3.4.2 培养基种类及培养时间对O111质谱图的影响分析 | 第42-43页 |
| 3.4.3 培养基种类及培养时间对O157质谱图的影响分析 | 第43-45页 |
| 3.4.4 方法准确性结果 | 第45-46页 |
| 3.5 展开全国实验室能力验证 | 第46-48页 |
| 3.5.1 能力验证样品均匀性检验结果分析 | 第46页 |
| 3.5.2 能力验证样品稳定性检验结果分析 | 第46-47页 |
| 3.5.3 全国实验室检测能力统计 | 第47-48页 |
| 第四章 结论 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
