| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-20页 |
| 1.1 概述 | 第10-12页 |
| 1.1.1 乳酸菌简介 | 第10页 |
| 1.1.2 乳酸菌的应用 | 第10-11页 |
| 1.1.3 乳酸菌面临的环境胁迫 | 第11-12页 |
| 1.2 国内外研究进展 | 第12-18页 |
| 1.2.1 乳酸菌的酸胁迫应对机制 | 第12-16页 |
| 1.2.2 提高乳酸菌酸胁迫抗性的策略 | 第16-18页 |
| 1.3 本论文立题依据和研究意义 | 第18-19页 |
| 1.4 本论文主要研究内容 | 第19-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-28页 |
| 2.1 材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第20页 |
| 2.1.2 试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 仪器 | 第20-21页 |
| 2.1.4 培养基及培养条件 | 第21页 |
| 2.2 验证Asp提高L.lactis NZ9000的酸胁迫抗性 | 第21-22页 |
| 2.2.1 Asp最适添加浓度的测定 | 第21页 |
| 2.2.2 Asp对L.lactis NZ9000生长性能影响的测定 | 第21-22页 |
| 2.2.3 L.lactis NZ9000乳酸产量的测定 | 第22页 |
| 2.2.4 L.lactis NZ9000酸胁迫抗性分析 | 第22页 |
| 2.3 Asp作用机制解析 | 第22-24页 |
| 2.3.1 荧光实时定量PCR | 第22-23页 |
| 2.3.2 L.lactis NZ9000胞内氨基酸含量的测定 | 第23页 |
| 2.3.3 L.lactis NZ9000胞内微环境分析 | 第23-24页 |
| 2.4 过量表达天冬酰胺酶提高L.lactis NZ9000的酸胁迫抗性 | 第24-26页 |
| 2.4.1 L.lactis NZ9000基因组的提取与ansB基因的扩增 | 第24页 |
| 2.4.2 pNZ8148质粒的提取 | 第24页 |
| 2.4.3 L.lactis NZ9000感受态的制备 | 第24页 |
| 2.4.4 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ansB表达载体的构建与转化 | 第24-25页 |
| 2.4.5 天冬酰胺酶的诱导表达、酶活力测定 | 第25页 |
| 2.4.6 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ansB生长和产酸性能的测定 | 第25页 |
| 2.4.7 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ansB胞内氨基酸含量的测定 | 第25-26页 |
| 2.4.8 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ansB存活率的测定 | 第26页 |
| 2.4.9 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ansB关键基因转录水平 | 第26页 |
| 2.4.10 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ansB胞内微环境分析 | 第26页 |
| 2.5 过量表达AcaP转运蛋白提高L.lactis NZ9000的酸胁迫抗性 | 第26-28页 |
| 2.5.1 ylcA基因的扩增 | 第26页 |
| 2.5.2 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ylcA表达载体的构建与转化 | 第26-27页 |
| 2.5.3 AcaP蛋白的诱导表达和SDS-PAGE分析 | 第27页 |
| 2.5.4 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ylcA存活率的测定 | 第27页 |
| 2.5.5 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ylcA关键基因转录水平 | 第27页 |
| 2.5.6 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ylcA胞内微环境分析 | 第27-28页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第28-42页 |
| 3.1 Asp提高L.lactis NZ9000酸胁迫抗性 | 第28-30页 |
| 3.1.1 Asp最适添加浓度的确定 | 第28页 |
| 3.1.2 Asp对L.lactis NZ9000生长性能的影响 | 第28页 |
| 3.1.3 Asp对L.lactis NZ9000乳酸产量的影响 | 第28-29页 |
| 3.1.4 Asp对L.lactis NZ9000酸胁迫抗性的影响 | 第29-30页 |
| 3.2 Asp作用机制解析 | 第30-33页 |
| 3.2.1 Asp对L.lactis NZ9000关键基因转录水平的影响 | 第30-31页 |
| 3.2.2 Asp对L.lactis NZ9000胞内Glu和GABA含量的影响 | 第31-32页 |
| 3.2.3 Asp对L.lactis NZ9000胞内微环境的影响 | 第32-33页 |
| 3.3 过量表达天冬酰胺酶提高L.lactis NZ9000的酸胁迫抗性 | 第33-37页 |
| 3.3.1 天冬酰胺酶的诱导表达和酶活测定 | 第33页 |
| 3.3.2 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ansB生长性能和乳酸产量的测定 | 第33-34页 |
| 3.3.3 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ansB胞内Asp和Glu含量的测定 | 第34页 |
| 3.3.4 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ansB存活率的测定 | 第34-35页 |
| 3.3.5 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ansB关键基因的转录水平分析 | 第35-36页 |
| 3.3.6 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ansB胞内ATP和氨基酸含量的测定 | 第36-37页 |
| 3.3.7 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ansBΔpH_i和胞内NH_4~+含量的测定 | 第37页 |
| 3.4 过量表达AcaP转运蛋白提高L.lactis NZ9000的酸胁迫抗性 | 第37-42页 |
| 3.4.1 AcaP蛋白的诱导表达和胞内Asp含量的测定 | 第37-38页 |
| 3.4.2 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ylcA生长性能和乳酸产量的测定 | 第38页 |
| 3.4.3 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ylcA存活率的测定 | 第38-39页 |
| 3.4.4 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ylcA关键基因的转录水平分析 | 第39-40页 |
| 3.4.5 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ylcA胞内ATP和氨基酸含量的测定 | 第40页 |
| 3.4.6 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ylcAΔpH_i和Δφ的测定 | 第40-42页 |
| 主要结论与展望 | 第42-44页 |
| 主要结论 | 第42页 |
| 展望 | 第42-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-53页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文和专利 | 第53页 |
