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调控天冬氨酸代谢途径提高Lactococcus lactis NZ9000的酸胁迫抗性

摘要第3-5页
Abstract第5-6页
第一章 绪论第10-20页
    1.1 概述第10-12页
        1.1.1 乳酸菌简介第10页
        1.1.2 乳酸菌的应用第10-11页
        1.1.3 乳酸菌面临的环境胁迫第11-12页
    1.2 国内外研究进展第12-18页
        1.2.1 乳酸菌的酸胁迫应对机制第12-16页
        1.2.2 提高乳酸菌酸胁迫抗性的策略第16-18页
    1.3 本论文立题依据和研究意义第18-19页
    1.4 本论文主要研究内容第19-20页
第二章 材料与方法第20-28页
    2.1 材料第20-21页
        2.1.1 菌株和质粒第20页
        2.1.2 试剂第20页
        2.1.3 仪器第20-21页
        2.1.4 培养基及培养条件第21页
    2.2 验证Asp提高L.lactis NZ9000的酸胁迫抗性第21-22页
        2.2.1 Asp最适添加浓度的测定第21页
        2.2.2 Asp对L.lactis NZ9000生长性能影响的测定第21-22页
        2.2.3 L.lactis NZ9000乳酸产量的测定第22页
        2.2.4 L.lactis NZ9000酸胁迫抗性分析第22页
    2.3 Asp作用机制解析第22-24页
        2.3.1 荧光实时定量PCR第22-23页
        2.3.2 L.lactis NZ9000胞内氨基酸含量的测定第23页
        2.3.3 L.lactis NZ9000胞内微环境分析第23-24页
    2.4 过量表达天冬酰胺酶提高L.lactis NZ9000的酸胁迫抗性第24-26页
        2.4.1 L.lactis NZ9000基因组的提取与ansB基因的扩增第24页
        2.4.2 pNZ8148质粒的提取第24页
        2.4.3 L.lactis NZ9000感受态的制备第24页
        2.4.4 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ansB表达载体的构建与转化第24-25页
        2.4.5 天冬酰胺酶的诱导表达、酶活力测定第25页
        2.4.6 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ansB生长和产酸性能的测定第25页
        2.4.7 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ansB胞内氨基酸含量的测定第25-26页
        2.4.8 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ansB存活率的测定第26页
        2.4.9 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ansB关键基因转录水平第26页
        2.4.10 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ansB胞内微环境分析第26页
    2.5 过量表达AcaP转运蛋白提高L.lactis NZ9000的酸胁迫抗性第26-28页
        2.5.1 ylcA基因的扩增第26页
        2.5.2 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ylcA表达载体的构建与转化第26-27页
        2.5.3 AcaP蛋白的诱导表达和SDS-PAGE分析第27页
        2.5.4 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ylcA存活率的测定第27页
        2.5.5 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ylcA关键基因转录水平第27页
        2.5.6 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ylcA胞内微环境分析第27-28页
第三章 结果与讨论第28-42页
    3.1 Asp提高L.lactis NZ9000酸胁迫抗性第28-30页
        3.1.1 Asp最适添加浓度的确定第28页
        3.1.2 Asp对L.lactis NZ9000生长性能的影响第28页
        3.1.3 Asp对L.lactis NZ9000乳酸产量的影响第28-29页
        3.1.4 Asp对L.lactis NZ9000酸胁迫抗性的影响第29-30页
    3.2 Asp作用机制解析第30-33页
        3.2.1 Asp对L.lactis NZ9000关键基因转录水平的影响第30-31页
        3.2.2 Asp对L.lactis NZ9000胞内Glu和GABA含量的影响第31-32页
        3.2.3 Asp对L.lactis NZ9000胞内微环境的影响第32-33页
    3.3 过量表达天冬酰胺酶提高L.lactis NZ9000的酸胁迫抗性第33-37页
        3.3.1 天冬酰胺酶的诱导表达和酶活测定第33页
        3.3.2 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ansB生长性能和乳酸产量的测定第33-34页
        3.3.3 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ansB胞内Asp和Glu含量的测定第34页
        3.3.4 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ansB存活率的测定第34-35页
        3.3.5 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ansB关键基因的转录水平分析第35-36页
        3.3.6 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ansB胞内ATP和氨基酸含量的测定第36-37页
        3.3.7 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ansBΔpH_i和胞内NH_4~+含量的测定第37页
    3.4 过量表达AcaP转运蛋白提高L.lactis NZ9000的酸胁迫抗性第37-42页
        3.4.1 AcaP蛋白的诱导表达和胞内Asp含量的测定第37-38页
        3.4.2 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ylcA生长性能和乳酸产量的测定第38页
        3.4.3 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ylcA存活率的测定第38-39页
        3.4.4 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ylcA关键基因的转录水平分析第39-40页
        3.4.5 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ylcA胞内ATP和氨基酸含量的测定第40页
        3.4.6 L.lactis NZ9000-pNZ8148-ylcAΔpH_i和Δφ的测定第40-42页
主要结论与展望第42-44页
    主要结论第42页
    展望第42-44页
致谢第44-45页
参考文献第45-53页
附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文和专利第53页

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